Contribution to the study of immune hemolysis by toad complement

Abstract

EA (sheep erythrocytes carrying rabbit antibody) are lysed by toad complement under optimal conditions which include a low concentration of cells (1.54 x 10*8/ml), a low temperature of incubation (30°C) and the same amounts of Ca++ and Mg++ as required for the titration of guinea-pig complement. Kinetic studies of the role of cations mentioned above in immune lysis by toad C have disclosed a fundamental difference as compared to guinea-pig C. In a limited complement system, the lysis by amphibian C is completely blocked by EDTA, even when the chelating agent is added as late as 15 minutes after zero-time. Inhibition by EGTA is only partial and the findings suggest that Mg++ is required not only at the beginning, but also at late stages of the lytic process. It has been speculated that the activation of amphibian complement proceeds mainly by the alternative pathway.EA (eritrócitos de carneiro, sensibilizados com anticorpos de coelho) são lisados por complemento de sapo em condições ótimas, que consistem no uso de uma baixa concentração de células (1.54 x 10*8/ml), incubação a baixa temperatura (30°C) e as mesmas quantidades de Ca++ e de Mg++, requeridas para a titulação da atividade hemolítica do complemento de cobaia. Estudos cinéticos do efeito dos cátions mencionados acima na imune-lise produzida pelo complemento de sapo revelam uma diferença fundamental com relação ao complemento de cobaía. Num sistema limitado pela quantidade de complemento, a lise pelo C de anfíbio é totalmente bloqueada por EDTA, mesmo quando a adição do agente quelante é feita após 15 minutos, ao passo que com EGTA o bloqueio é apenas parcial. Os achados experimentais sugerem que Mg++ seja requerido não apenas no estágio inicial, mas também em estágios tardios do processo lítico e permitem especular que a ativação do complemento de anfíbio se processa predominantemente pela via alternativa.