DEN2重组E蛋白单克隆抗体的制备及其生物学活性

Abstract

【目的】研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性。【方法】用纯化的Pichiapastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株。采用硫酸铵沉淀法纯化腹水中的McAbs,用ELISA、IFA、WesternBlot和空斑减数中和实验等鉴定McAbs的各种生物学活性。【结果】用ELISA、IFA检测证实5株杂交瘤细胞产生的McAbs与DEN2重组E蛋白和DEN全病毒均有较高的亲和力;WesternBlot分析发现其中3株杂交瘤细胞(3G3,6G11,4E3)分泌的McAbs能与其相对分子质量Mr=(66~69)×103的DEN2重组E蛋白结合。空斑减数中和实验证实所获得的单克隆抗体具有中和登革病毒感染C6/36细胞的作用。【结论】成功地制备了5株抗登革病毒E蛋白特异性的McAbs,为进一步研究E蛋白的结构和功能及临床诊断试剂盒研发打下了基础。