مجله دانشگاه علوم پزشکی سبزوار (Jan 1970)
جداسازی، شناسایی بیوشیمیایی و مولکولی باکتریهای پروبیوتیکی از محصولات لبنی سنتی سبزوار
Abstract
زمینه و هدف: پروبیوتیک ها میکروارگانیسم های غیر پاتوژن و مفیدی هستند که شناسایی آنها در محصولات لبنی سنتی نه تنها می‌تواند منجر به جداسازی باکتریهای پروبیوتیکی با خصوصیات ویژه شود، بلکه می‌تواند دیدگاه مناسبی برای تولید انبوه محصولات لبنی سنتی که به طور طبیعی حاوی باکتریهای پروبیوتیکی هستند به ما عرضه کند. مواد و روش ها: پس از نمونه برداری محصولات لبنی از مناطق مختلف شهرستان، کشت‌های متوالی بر روی محیط‌های اختصاصی MRS Broth و MRS انجام شد. شناسایی اولیه با رنگ آمیزی گرم، تست حرکت، تست احیای نیترات، رشد در دمای oC 15 و 45، رشد در 6/9pH= و همچنین قابلیت تخمیر 11 قند بررسی شد. جهت تعیین دقیق سویه مورد نظر، ژن 16S rDNA با جفت آغازگرهای اختصاصی توسط PCR تکثیر داده شد و تعیین توالی گردید. توالی های حاصل بعد از ویرایش، بلاست نوکلئوتیدی شدند. در پایان تست تحمل شرایط اسیدی و صفراوی نیز برای نمونه های مثبت مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: پس از انجام کشت‌های متوالی بر روی محیط‌های آگار اختصاصی، 16 سویه باکتری برای آنالیزهای بعدی انتخاب شدند. در شناسایی اولیه سویه‌ها توسط روش‌های فنوتیپی، 14 نمونه مثبت بودند که سپس برای شناسایی دقیق‌تر، ژن 16S rDNA تمام نمونه ها با PCR تکثیر داده شد. بعد از شناسایی مولکولی و تعیین توالی ژن 16S rDNA، بلاست توالی ها شباهت بالای نمونه ها با Lactobacillus plantarum را نشان داد. نتایج تحمل شرایط اسیدی و صفراوی نیز نشان داد که این باکتریها بهترین رشد را در 4pH= دارا می‌باشند و سویه مورد نظر توانایی رشد در حضور نمک صفراوی را دارد. نتیجه گیری: نتایج بیوشیمیایی نشان داد که سویه رایج در محصولات مورد بررسی لاکتوباسیلوس است که تست‌های مولکولی و تعیین توالی نیز وجود L. plantarum را در محصولات مورد نظر تایید نمود. همچنین تست تحمل شرایط اسیدی و صفراوی بعنوان مهمترین خصوصیت باکتریهای پروبیوتیک نشان داد که سویه مورد نظر توانایی تحمل این شرایط را دارا می‌باشد.
