应用噬菌体随机肽库筛选 2 型登革病毒 E 蛋白的抗原表位

Abstract

【目的】通过型特异性单抗与噬菌体随机 12 肽库的生物淘洗,确定 2 型登革病毒E 蛋白分子的抗原表位。【方法】以 DEN2 型特 异的 E 单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体随机 12 肽库,将筛选的噬菌体阳性克隆进行 ELISA 检测、DNA 序列测定及展示肽的氨基 酸序列推导,通过展示肽序列与 DEN2 E 蛋白的氨基酸一级结构的对比,确定 E 蛋白的抗原优势表位并用相应的合成肽验证。【结果】常规生 物淘洗获得富含芳香族氨基酸并有 aHWbW 核心结构的克隆,确定为非特异的塑料结合噬菌体。 改进淘洗方法后, 肽库筛选的噬菌体阳性克 隆有共同的结构模体 WFKKGS,与DEN2 E 蛋白分子的390～ 397 有3～ 5 个氨基酸相同。其对应的合成 10 肽能与淘洗单抗特异反应,并可抑 制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。【结论】本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定 DEN2 E 蛋白 390～ 397 氨基酸残基(WFKKGSSI)存 在一线性的 B 细胞抗原表位。