VALIDAÇÃO DE CONGELADORA PROGRAMADA: PRODUTOS DE TERAPIA CELULAR PARA A INDÚSTRIA FARMACÊUTICA

Abstract

Este trabalho descreve a validação do congelador programado (PF) para congelamento de linfócitos obtidos por aférese para posterior fabricação de produtos avançados de terapia celular pela Novartis. Utilizamos amostras de Buffy-Coat (BF), obtidas das Câmaras LRS de coleta de aférese de plaquetas imitando um produto HPC, que foram dispensadas, em uma cabine de segurança biológica, em um tubo seco selecionando o número de câmaras que fariam parte do mesmo bolsa de BF, e depois transferidas para um bolsa de transferência de 300 mL. Foi transferido 1 mL para um tubo com EDTA para contagem de leucócitos e viabilidade pré-congelamento. Foram produzidos 5 bolsas com BF: 17 mL, 19 mL, 20 mL, 26 mL, 46 mL; a Solução Crioprotetora (CS) foi Dimetilsulfóxido 5%; Proteína: Albumina humana 2,5%; Solução eletrolítica: Plasma-Lyte A. Após a preparação, a CS foi refrigerada em uma câmara de resfriamento a 2‒8°C e injetada lentamente no bolsa contendo BF, enquanto se misturava suavemente. A partir desta etapa, um pacote de gel (pré-resfriado) foi usado para manter os bolsas contendo a CS e o produto refrigerados. Além disso, 5 mL de amostras foram reservados para o preenchimento dos tubos criogênicos. Após, o conteúdo do bolsa de transferência foi transferido para um bolsa de criopreservação, o ar foi removido, selado e a identificação do bolsa, tubos criogênicos e placa foi realizada usando etiquetas. No congelador programado, o bolsa foi colocado em um cilindro para congelamento em um rack específico. Os 5 tubos criogênicos foram congelados na mesma execução em um rack de tubos separado. O sensor para o bolsa foi posicionado ao lado dele, fixado com fita microporo. O PF foi configurado e a execução foi iniciada. Ao final do congelamento, o cilindro foi transferido para o tanque MVE, colocado em um rack específico. Os tubos criogênicos foram armazenados em uma caixa de metal e colocados em outro rack específico no tanque MVE também. O cilindro e os tubos foram deixados no tanque MVE (fase de vapor) por um período específico e removidos para realizar o teste de viabilidade no bolsa e nos tubos criogênicos. Os critérios de aceitação incluíam inspeção visual: sem danos ao bolsa e às etiquetas, sem deterioração, quebra ou deformidade plástica durante o processo de criopreservação. A curva de congelamento foi realizada de acordo com o programa de congelamento aprovado pela Novartis, o tempo médio das 03 curvas realizadas foi de 75,6 minutos (aproximadamente 1 hora e 15 minutos). Os resultados da viabilidade celular pré congelamento com média de 99,58% (99,30‒100,00) e contagem de linfócitos pré 1,33E+08 (1,18E+08 – 1,39E+08). E na fase pós congelamento a viabilidade da bolsa criopreservada teve média 99,26% (97,41–100,00) e a viabilidade celular no tubo teve média 99% (97,41‒99,64), demonstram que a curva de congelamento realizada está de acordo com as especificações solicitadas pela farmacêutica Novartis para a criopreservação de linfócitos para a subsequente fabricação de produtos avançados de terapia celular, não causando danos ao produto criopreservado.