O SILENCIAMENTO DE RHOA PROVOCA ALTERAÇÕES EM LARGA ESCALA NA EXPRESSÃO GÊNICA GLOBAL DE CÉLULAS DE LEUCEMIA

Abstract

Introdução: RHOA é uma proteína Rho GTPase crucial no controle da dinâmica do citoesqueleto. Além disso, Rho GTPases também regulam a expressão gênica. A expressão de RHOA está desregulada e foi associada ao pior prognóstico em diversos tipos de câncer. Porém, suas funções em células leucêmicas ainda não foram exploradas. Objetivo: Explorar as vias de sinalização associadas a RHOA em células leucêmicas através da análise de transcriptoma (RNA-seq). Materiais e métodos: Células da linhagem mieloide OCI-AML3 foram silenciadas para RHOA com lentivírus específico (shRHOA). Células transduzidas com lentivírus controle foram utilizadas para comparação (shCTRL). O silenciamento foi confirmado por PCR em tempo real e western blot, e a expressão gênica global foi avaliada por RNAseq (Illumina). Uma lista de genes diferencialmente expressos com significância estatística definida em p < 0.05 (FDR ≤ 0.05) foi gerada após o processamento dos dados. Análises de enriquecimento de genes e vias de sinalização alteradas foram realizadas com software Gene Set Enrichment Analysis (GSEA) e a plataforma STRING. Resultados: Observamos uma redução de expressão gênica e proteica acima de 80% nas células shRHOA em comparação as células shCTRL. Células silenciadas para RHOA apresentaram expressão diferencial de 222 genes em comparação as células shCTRL (130 genes super expressos e 92 genes menos expressos). Observamos alteração na expressão de genes associados a múltiplos processos celulares, incluindo (a) proliferação e diferenciação celular; (b) componentes da MEC; (c) reorganização do citoesqueleto; (d) reparo e morte celular; (e) degradação de proteínas; (f) transporte e sinalização celular; (g) metabolismo celular e (h) sistema imune. Dentre os genes alterados, LHX2, NKD2 e FAT1 foram genes encontrados com menor valor de expressão, enquanto genes como FN1, CADM1 e FGF2 demonstraram maior valor de expressão em células shRHOA em comparação à shCTRL. Discussão: O grande número de genes cuja expressão foi alterada pelo silenciamento de RHOA indica que esta proteína possui funções cruciais em células mieloides. Estes achados estão de acordo com o fenótipo observado pelo nosso grupo de pesquisa: redução da proliferação, migração, adesão e alterações no citoesqueleto de células shRHOA em comparação as células shCTRL. Conclusão: Nossos dados são promissores fornecem novas direções quanto às vias de sinalização envolvidas na alteração fenotípica induzida pelo silenciamento de RHOA em células leucêmicas. RHOA tem se mostrado importante em células leucêmicas e explorar as vias de sinalização associadas a esta proteína pode levar a descoberta de novos alvos terapêuticos. Financiamento: FAPESP.