Peroxidase from peach fruit: thermal Stability

Abstract

Peroxidase from peach fruit was purified 28.9-fold by DEAE-cellulose, Sephadex G-100 and hydroxylapatite chromatography. The purified enzyme showed only one peak of activity with an optimum pH of 5.0 and temperature of 40ºC. The calculated activation energy (Ea) for the reaction was 7.97 kcal/mol. The enzyme was heat-labile in the temperature range of 60 to 80ºC with a fast inactivation at 80ºC. PAGE of the inactivation course at 70ºC showed only one band of activity. Different sugars increased the heat stability of the activity in the following order: sucrose>lactose>glucose>fructose. Measurement of residual activity showed a stabilizing effect of sucrose at various temperature/sugar concentrations (10 to 40%, w/w) with the Ea for inactivation increasing with sucrose concentration from 0 to 20% (w/w). After inactivation at 70ºC and 75ºC the enzyme was able to be reactivated by up to 40% of the initial activity when stored at 30ºC.A peroxidase de pessego foi purificada 28,9 vezes por cromatografia de DEAE-celulose, Sephadex G-100 e hidroxiapatite. A enzima purificada mostrou um único pico de atividade apresentando pH ótimo de 5,0 e temperatura de 40ºC. A energia de ativação para a reação foi 7,97 kcal/mol. A enzima mostrou-se termolábil na faixa de 60 a 80ºC, e com uma inativação rápida a 80ºC. A eletroforese em gel de poliacrilamida do transcurso da inativação a 70ºC mostrou uma só banda de atividade. Diferentes tipos de açucares aumentaram a estabilidade térmica da atividade enzimática, na seguinte ordem: sacarose> lactose>glicose>frutose. Medida da atividade residual mostrou um efeito estabilizante da sacarose a várias relações temperatura/concentração (10 a 40%, p/p). A energia de ativação para inativação aumentou com aumento crescente da concentração de sacarose de 0-20% (p/p). Após inativação a 70ºC e 75ºC a enzima foi capaz de ser reativada até 40% da atividade inicial quando armazenada a 30ºC

Keywords

• Peach peroxidase
• purification
• heat stability
• regeneration