جداسازی باکتری‌های تجزیه‌کننده لیپید از پساب‌های صنعتی و شناسایی مولکولی آنها

Abstract

زمینه و هدف: لیپازهای میکروبی، گروه مهمی از آنزیم­های باارزش بیوتکنولوژی محسوب می­شوند. در تحقیق حاضر تلاش شد تا سویه‌های میکروبی تولیدکننده لیپاز ازنمونه‌های پساب‌های صنعتی جداسازی و شناسایی شوند.مواد و روش­ها: پس ازنمونه‌برداری از فاضلاب و پساب محل‌های مختلف، 16 کلونی از این نمونه‌ها جداسازی شد. جدایه‌ها برای بررسی توانایی تولید آنزیم لیپاز، همراه با یک سویه اکتینومیست به‌عنوان کنترل مثبت، در محیط کشت اختصاصی حاوی تویین80، کشت داده شدند. فعالیت آنزیمی براساس نمودار استاندارد لیپاز، بررسی شد. به‌منظور تشخیص مولکولی جدایه‌ها ریبوتایپینگ انجام شد. بدین منظور، DNA جدایه‌ها با کمک کیت، استخراج شدند و با الکتروفورز و دستگاه نانودراپ ارزیابی گردید. سپس PCR با کمک پرایمرهای ژن 16SrRNA صورت گرفته و محصول PCR تعیین توالی شده و با استفاده از بلاست توالی‌ها در پایگاه داده NCBI، سویه‌ها شناسایی شدند.یافته­ ها: از مجموع 6 جدایه، ده سویه (62/5 درصد) قادر به تولید آنزیم لیپاز و در نتیجه ایجاد هاله شفاف در محیط کشت حاوی لیپید بودند. از این میان، دو جدایه با میزان تشکیل هاله و منبع جداسازی مشابه که بیشترین رشد و فعالیت را در 144 ساعت پس از کشت نشان داده بودند، انتخاب شدند. مقادیر فعالیت آنزیمی برای باکتری جداشده از پساب کشتارگاه و پساب مکانیکی به‌ترتیب در بازه بین 2/99 تا 22/65 و 3/73 تا39/2 واحد بر میلی‌لیتر بود.نتیجه‌گیری: باکتری‌های آئروموناس ورونی و کوپریاویدوس متالیدورانس به دلیل فعالیت لیپازی بسیار بالا نسبت به سویه­ های معرفی‌شده در سایر تحقیقات، به‌عنوان سویه‌های بسیارمناسب و کارآمد جهت تصفیه زیستی پساب‌ها پیشنهاد می­گردد.

Keywords

• پساب صنعتی
• باکتری ها
• تجزیه لیپید
• شناسایی مولکولی