Hematology, Transfusion and Cell Therapy (Oct 2023)
DESENVOLVIMENTO DE TESTE DIAGNÓSTICO DE ALTA SENSIBILIDADE PARA DETECÇÃO DA VARIANTE SOMÁTICA L265P NO GENE MYD88 PARA DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE MACROGLOBULINEMIA DE WALDENSTRÖM
Abstract
Objetivo: Desenvolvimento e implementação de teste diagnóstico sensível e custo-efetivo para detecção da variante somática L265P no gene MYD88 pela técnica de PCR digital. Material e método: Foi utilizada plataforma de PCR digital da QIAGEN e ensaio TaqMan para a alteração L265P em MYD88. As amostras utilizadas na validação tinham resultado conhecido em teste de referência (sequenciamento SANGER ou de próxima geração - NGS). DNA sintéticos com e sem a variante foram misturados em diferentes proporções e submetidos às reações. O ensaio de PCR digital foi avaliado quanto à linearidade, sensibilidade, reprodutibilidade em 3 frequências alélicas diferentes, limite de detecção (LoD) e limite de branco (LoB). Resultado: O ensaio apresentou robustez e linearidade em todas as faixas de frequência alélica avaliadas. O teste se mostrou sensível, confirmando todas as alterações reportadas em teste de referência, e ainda detectando alterações em baixa frequência alélica (confirmado por método ortogonal) em amostras previamente consideradas selvagens pelo teste referência. A reprodutibilidade teve coeficientes de variação dentro do esperado para cada faixa de frequência alélica tanto com amostras biológicas quanto com DNA sintético. A avaliação de LoB mostrou especificidade e permitiu definir um LoD de 0,5% de frequência alélica da variante L265P. Discussão: A detecção da variante MYD88 L265P é importante para o diagnóstico diferencial de Macroglobulinemia de Waldenström (MW) com outros subtipos de linfomas B que apresentam pico monoclonal IgM, ou que apresentam diferenciação plasmocítica. A presença da variante L265P é fortemente favorável ao diagnóstico de MW na presença de características clínicas e histológicas apropriadas. Além disso, a variante L265P serve como um biomarcador para resposta à terapia com inibidores de BTK (tirosina quinase de Bruton). As taxas de resposta para ibrutinibe em pacientes com MW com a variante MYD88 L265P de tipo selvagem são próximas de 100% no cenário de primeira linha de tratamento e acima de 90% no cenário recidivante/refratário. Principalmente por conta do acompanhamento de resposta, a detecção de frequências alélicas baixas por metodologia sensível é de suma importância. A PCR digital traz o benefício da alta sensibilidade comparada a qPCR e custo-efetividade comparada ao NGS. A estratégia se mostrou relevante mesmo em amostras ao diagnóstico, com baixa frequência alélica da variante, pois outras metodologias talvez não fossem capaz de identificar a alteração. Conclusão: O teste validado tem performance adequada tanto para o diagnóstico diferencial como para o acompanhamento do tratamento com inibidores de BTK e pode ser implementado na rotina de análises clínicas.