TRIAGEM DE DOADORES COM FENÓTIPOS RAROS USANDO PCR DIGITAL EM NANOPLACAS – UM ESTUDO PILOTO

Abstract

Introdução: A triagem de doadores de sangue raros (frequência <1/1.000) é necessária para atender a demanda de pacientes com necessidades transfusionais específicas, mas necessita da análise de muitas amostras, o que pode implicar em custos elevados. Nesse contexto, a triagem de doadores em pool é uma estratégia potencialmente útil. Objetivos: Analisar a viabilidade da utilização da PCR digital para a triagem de doadores com fenótipos raros utilizando como modelo o fenótipo raro Di(a+b-) (Diego), cuja frequência estimada em Minas Gerais é de 0,01%. Metodologia: Pools contendo amostras de doadores com genótipos previamente conhecidos foram analisados utilizando o equipamento QIAcuity One (Qiagen). Reações de 50 uL contendo Probe PCR master mix (Qiagen), sonda de hidrólise com marcação fluorescente FAM (Thermo Fisher) específica para o alelo DI*A e primers customizados foram aplicadas em nanoplacas de 8.000 partições. As seguintes composições de amostras foram avaliadas: três pools de 25 amostras (25 DI*B/DI*B; 24 DI*B/DI*B + 1 DI*A/DI*B; 24 DI*B/DI*B + 1 DI*A/DI*A), três pools de 50 amostras (50 DI*B/DI*B; 49 DI*B/DI*B + 1 DI*A/DI*B; 49 DI*B/DI*B + 1 DI*A/DI*A) e três pools de 100 amostras (100 DI*B/DI*B; 99 DI*B/DI*B + 1 DI*A/DI*B; 99 DI*B/DI*B + 1 DI*A/DI*A). Resultados e discussão: Foi possível identificar uma amostra DI*A positiva em pools de 25, 50 e 100 amostras, assim como discriminar pools contendo amostras homozigotas ou heterozigotas. Simulações utilizando modelo matemático proposto por Regen et al. (2020) indicaram que o tamanho de pool ideal para triagem de homozigotos DI*A/DI*A seria de 84 amostras. Conclusão: A PCR digital utilizando nanoplacas apresenta grande potencial para triagem de doadores raros. A definição do número ideal de amostras por pool deve considerar a frequência dos alelos de interesse e a probablilidade de ocorrência concomitante de amostras positivas (homozigotas e heterozigotas) nos pools. Estudos adicionais são necessários para a validação da estratégia. Apoio financeiro: Fapemig e Hemominas.