细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 的构建及转化

Abstract

【目的】构建并转化能在酵母菌AH109 中表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 。 【方法】用RT-PCR 方法从人T 淋巴细胞中扩增MIF 基因全外显子片段, 并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7 中; 用PEG/ LiAC 法将pGBKT7-MIF 转化感受态酵母菌AH109 。提取转化酵母菌的质粒DNA , 转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴 定。【结果】扩增出人MIF cDNA 片段, 限制性内切酶酶切和DNA 测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-MIF ;获得可在色 氨酸缺陷培养基(SD/-trp)上生长含pGBKT7-MIF 的酵母菌克隆。酶切鉴定表明pGBKT7-MIF 已转化入酵母菌AH109 。【结 论】成功构建穿梭质粒pGBKT7-M IF, 并转化入酵母菌AH109。