Optimización de las condiciones de biobalística de baja presión para análisis de expresión transitoria de genes heterólogos en hojas de tabaco cultivadas in vitro

Abstract

Los estudios de expresión transitoria de genes heterólogos de interés biotecnológico son un paso previo a su expresión estable en plantas transgénicas. El objetivo del trabajo fue optimizar las condiciones de biobalística para realizar ensayos de expresión transitoria de genes heterólogos en Nicotiana tabacum variedad Xanthi (tabaco) utilizando la pistola de genes de baja presión Helios® Gene Gun (BioRad®). Como gen heterólogo se utilizó al promotor 35S de CaMV fusionado al gen uidA (GUS) clonado en el vector pBI121. Las condiciones evaluadas fueron: presión de disparo, número de disparos y distancia de disparo sobre discos de hojas u hojas completas de tabaco cultivadas in vitro. La expresión de GUS se evaluó como el promedio del número de puntos azules observados en los tejidos bombardeados. únicamente se consideraron puntos azules cuando se utilizaron hojas completas de tabaco. Se observó un mayor número de puntos azules cuando se empleó una presión de 160 psi, cuatro disparos y un bombardeo directo sobre hojas completas. Para confirmar las condiciones obtenidas se utilizó el vector pCAMBIA 1305.2, observándose un alto número de puntos azules en los tejidos bombardeados, indicativo de la eficiencia de las condiciones optimizadas en el presente trabajo.

Keywords

• b-Glucuronidasa
• expresión transitoria
• Helios® Gene Gun System
• Geminivirus