همسانه‌سازی ژن hsp70 مایکوباکتریوم اویوم تحت‌گونه پاراتوبرکلوزیس در پلاسمید pET-24a و بیان آن در باکتری اشریشیا‌ کولای

Abstract

بیماری یون (پاراتوبرکلوزیس) ناشی از باکتری مایکوباکتریوم اویوم پاراتوبرکلوزیس (Mycobacterium avium paratuberculosis; MAP) عفونت مزمن و پیشرونده­ای بوده و به­طور عمده نشخوارکنندگان را درگیر می­سازد. این بیماری می­تواند خسارات اقتصادی فراوانی را به صنعت دامپروری وارد سازد و ممکن است تهدیدی نیز برای بهداشت عمومی باشد، چون با انتقال از راه شیر و دیگر فراورده­های دامی آلوده ممکن است انسان را نیز آلوده نماید. مقاومت و ایمنی در برابر بیماری یون، بیش­تر به پاسخ ایمنی با واسطۀ سلولی مرتبط است. پروتئین شوک حرارتی­70 (heat shock protein70; HSP70) باکتری فوق، یکی از پروتئین­های مهم آن می­باشد که پاسخ ضد آن از دفع مدفوعی باکتری جلوگیری می­کند. به‌منظور فراهم­سازی تولید واکسن نوترکیب جهت مقابله با بیماری یون، در این مطالعه تولید HSP نوترکیب (recombinat HSP; rHSP) و بررسی ایمنی­زایی آن در خرگوش مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور ژن ­hsp70 در پلاسمید pET-24a همسانه­سازی گردید و پلاسمید نوترکیب حاصله به سویۀ ­BL21 باکتری اشریشیا­ کولای منتقل شد. بیان پروتئین فوق با استفاده از SDS-PAGE بررسی و صحت توالی نوکلئوتیدی با تعیین توالی، تأیید گردید. تزریق rHSP70 به خرگوش با تولید سطح بالایی از آنتی­بادی ضدِّ آن همراه بود. بر اساس یافته­ها، به نظر می­رسد که آنتی­بادی ضد rHSP70 را می­توان در طراحی روش­های تشخیصی بیماری و پروتئین نوترکیب تولیدشده را جهت تولید واکسن­های نوترکیب مورد ارزیابی قرار داد.

Keywords

• بیماری یون
• پروتئین شوک حرارتی‌70
• مایکوباکتریوم اویوم پاراتوبرکلوزیس
• همسانه‌سازی
• پلاسمید pet-24a