Cukurova Medical Journal (Mar 2017)
PRIMA1 ile lösemi hücrelerinde Bruton tirozin kinaz inhibisyonu aracılığı apoptoz uyarımı
Abstract
Amaç: Bruton’s tirozin kinaz (Btk) , B lenfositlerinin gelişimi, proliferasyonu ve B hücre serilerinin farklılaşmasında, B hücre reseptörü (BCR) aracılı sinyal iletiminde kritik rol oynadığı bilinmektedir. Bu çalışmada PRIMA-1’in Btk aktivitesi üzerindeki antitumor etkisi ve altta yatan apopitoz mekanizması araştırılmıştır. Gereç ve Yöntem: KBM3 ve Namalwa hücrelerinde Btk ekpresyon seviyesi üzerine PRIMA 1’in etkisini kontrol etmek için kantitatif real time PCR ve Western Blot analizi yapılmıştır. FACS ve flouresan mikroskobi kullanılarak apoptozda Btk ‘nın rolünü belirlemek için, wild tip Btk ve Btk-NLS ( Nükleus hedefli Btk) ekpresyon plazmidleri COS-7 hücrelerine transfekte edildi.Bulgular: Bu çalışmada, akut myelomonositik lösemi hücrelerine anti lösemik ilaç uygulanması sonucunda, Btk ekspresyonun mRNA ve protein seviyesinde baskılanmasını gözlemledik. Böylece Nrf2 ve HO-1 proteinlerinin ekpresyonlarında bir azalma olduğunu da farkettik. Dikkat çekici bir şekilde Btk nükleer lokalizasyonu, düşük dozda PRIMA-1 uygulaması ile artıyorken, yüksek dozda PRIMA -1 uygulaması ile Btk ekspresyonu baskılanıyor. Buna ek olarak, wild tip Btk ile kıyaslandığında, nükleer hedefli aşırı ekspresyonda, apoptozisde azalma ve hücre canlılık oranında artış ile sonuçlanıyor. Sonuç: Bulgularımıza göre, PRIMA-1 uygulaması ile Nrf2 ve HO-1 oksidatif cevap aracılığı ile nükleer Btk, hücre apoptozunu azalmaktadır.
Keywords
