Acta Biológica Colombiana (May 2011)
Evaluación de dos métodos de extracción de ADN a partir de biopsias fijadas en formalina y embebidas en parafina en condiciones no optimas
Abstract
Los tejidos de archivo son un material de incalculable valor para estudios retrospectivos que requieran la aplicación de análisis moleculares. Existen múltiples métodos de extracción de ADN a partir de este tipo de muestras. No obstante, la mayoría de métodos toman mucho tiempo y los reactivos empleados contribuyen a la fragmentación del ADN. Con el objetivo de optimizar dos métodos de extracción de ADN a partir de tejidos embebidos en parafina en condiciones no optimas. Se seleccionaron 47 bloques en parafina que contenían biopsias de pleura, pulmón y pericardio correspondientes a 24 pacientes (66,66%hombres) mayores de 18 años, con inflamación granulomatosa crónica, remitidos al Departamento de Patología del Hospital Universitario del Valle entre 2002-2007. A cada muestra se le realizaron 10 cortes y se sometieron a dos métodos de extracción de ADN: 1.Convencional y 2.QIAamp-DNA mini kit®. La eficiencia del ADN fue valorada por espectrofotometría y amplificación del gen GAPDH. La concentración de ADN de las muestras extraídas por el método convencional fue de 65.52ng/µl ±11.47 (promedio±EE) y la relación 260/280 vario entre 0.52 y 2.30. De las muestras extraídas por el método comercial, la concentración media de ADN fue 60.89ng/µl±6.02, con una absorbancia que oscilo entre 0 y 2.64. El ADN obtenido fue sometido a PCR, de 47 muestras extraídas por ambos métodos, 25 y 23 respectivamente amplificarón exitosamente el gen GAPDH. Los métodos usados para la obtención de ADN presentaron un desempeño similar, revelando así su potencial utilidad en estudios retrospectivos a partir de biopsias embebidas en parafina en condiciones inadecuadas.
