Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (May 2022)
CircOMA1调控多巴胺受体促进泌乳素瘤耐药性
Abstract
目的探究环状RNA hsa_circ_0002316（circOMA1）是否参与泌乳素瘤耐药调控及其作用机制是什么。方法通过RT-qPCR检测临床泌乳素瘤标本中circOMA1表达情况（5例敏感泌乳素瘤标本和12例耐药泌乳素瘤标本）。通过慢病毒载体构建稳定表达外源性circOMA1 MMQ细胞系模型进行体外实验，分为MMQ NC组及MMQ OMA1组。通过构建裸鼠皮下肿瘤模型进行体内实验，分为MMQ NC+卡麦角林（CAB）组、MMQ NC+溴隐亭（BRC）组、MMQ OMA1+CAB组、MMQ OMA1+BRC组。通过CCK8、Western blot、ELISA等表型实验检测circOMA1对耐药机制中的细胞增殖和泌乳素（PRL）分泌两个方面的影响。通过Western blot、ELISA、免疫组化等实验检测circOMA1对多巴胺受体表达的影响。通过TargetScan、CircInteractome等软件分析预测、 microRNA-145-5p（miR-145-5p） minic补救实验探究circOMA1调控多巴胺受体机制。结果RT-qPCR结果显示多巴胺受体激动剂（DAs）耐药泌乳素瘤中circOMA1表达升高（P＜0.01）。在细胞实验及裸鼠皮下肿瘤实验中，与MMQ NC组相比，MMQ OMA1组DAs敏感性降低，细胞增殖水平和泌乳素分泌水平升高（P＜0.05）。Western blot和免疫组化结果显示，MMQ OMA1组多巴胺2型受体（DRD2）表达下调，多巴胺5型受体（DRD5）表达上调，环3’，5’-单磷酸腺苷（cAMP）水平上调（P＜0.05）。此外，在MMQ OMA1组中miR-145-5p表达下调，kelch重复序列和BTB结构域蛋白7（KBTBD7）mRNA及蛋白表达水平上调（P＜0.05），然而MMQ OMA1组转染miR-145-5p minic后，KBTBD7表达下调，DRD2表达上调（P＜0.05），表明过表达miR-145-5p逆转了circOMA1对KBTBD7的促进作用。结论circOMA1通过miR-145-5p/KBTBD7轴下调DRD2表达，降低泌乳素瘤对DAs敏感性，并且调控多巴胺受体表达激活cAMP通路促进泌乳素合成释放，从而促进泌乳素瘤耐药性。
