Revista Cubana de Investigaciones Biomédicas (Sep 2006)
Cambios en la actividad biológica de un antígeno debido a la temperatura generada durante la electroforesis de poliacrilamida Changes in the biological activity of an antigen due to the temperature generated during the polyacrylamide electrophoresis
Abstract
Se evaluó el efecto que origina la temperatura sobre la actividad biológica de un antígeno durante la electroforesis en geles no reductores de poliacrilamida, porque en ocasiones la técnica precede a la electroelusión, método empleado en la purificación de determinadas proteínas. Se utilizó el antígeno específico prostático para el ensayo, este se purificó a partir del semen de pacientes voluntarios, precipitado con sulfato de amonio 70 %. Las corridas (3 para cada temperatura), se llevaron a cabo a 4 y 25 °C, y se realizaron a 20 mA. Para cada temperatura ensayada, los fragmentos provenientes de los geles cortados a la talla esperada para el antígeno específico prostático (33 kDa), se electroeluyeron a 4 °C. Mediante la comparación de las concentraciones de proteínas empleando la técnica de Lowry y el método radioinmunoenzimático, se cuantificó la cantidad de proteína biológicamente activa posterior a la electroforesis. Se utilizó un antígeno específico prostático comercial como control. Los resultados indican que el antígeno a 4 °C, conserva 80 % de su actividad biológica, lo que no sucede a 25 °C donde más de 50 % de la proteína es biológicamente inactiva.The effect of temperature on the biological activity of an antigen during the electrophoresis in non-reducing polyacrylamide gels was evaluated because on occasions the technique precedes electroelution, a method used in the purification of certain proteins. The prostate specific antigen was utilized for the assay. It was purified starting from the semen of voluntary patients. It was precipitated with ammonium sulfate 70 %. The repetitions (3 for each temperature) were made at 4 and 25 °C and at 20 mA. For every tested temperature, the fragments from the gels cut at the expected size for the specific prostatic antigen (33 kDa) were electroeluted at 4 °C. By comparing the protein concentrations using Lowry’s technique and the radioimmunoenzymatic method, it was quantified the amount of biologically active protein after the electrophoresis. A commercial prostate specific antigen was used as control. The results indicate that at 4 °C the antigen keeps 80 % of its biological activity, which does not occur at 25 °C, where more than 50 % of the protein is biologically inactive.
