Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban (Jul 2022)
miR-96-5p靶向叉头状转录因子O1对Ishikawa细胞的作用
Abstract
目的探讨微小RNA（miR）-96-5p通过靶向叉头状转录因子O1（FOXO1）基因对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测正常组织和子宫内膜癌组织中miR-96-5p和FOXO1 mRNA的表达，Western blot法检测FOXO1蛋白表达。分析miR-96-5p及FOXO1表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系。转染pcDNA、pcDNA-FOXO1、inhibitor NC、miR-96-5p inhibitor、miR-96-5p mimic、miR-96-5p + FOXO1到子宫内膜癌Ishikawa细胞，分别记为pcDNA组、FOXO1组、inhibitor NC组、miR-96-5p inhibitor组、miR-96-5p组、miR-96-5p + FOXO1组，对照组不进行转染。取稳定转染的各组细胞，CCK-8和Transwell小室检测细胞活力和侵袭能力，Western blot检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、活化多聚ADP核糖聚合酶（cleaved PARP）、p21及波形蛋白的表达水平。TargetScan网站预测miR-96-5p与FOXO1的靶向关系，双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。Ishikawa细胞分为mimic NC组、miR-96-5p组、inhibitor NC组、miR-96-5p inhibitor 组，qRT-PCR检测各转染组miR-96-5p和FOXO1 mRNA的表达，Western blot法检测FOXO1 蛋白表达。结果子宫内膜癌组织中miR-96-5p的相对表达量较正常组织上调，相反，FOXO1 mRNA和蛋白相对表达量下调（P<0.01）。子宫内膜癌患者中miR-96-5p高表达与病理分级和临床分期呈正相关（P=0.034，P=0.010），与年龄和是否绝经无明显相关性（P=0.370，P=0.166）； FOXO1低表达与病理分级和临床分期呈负相关（P=0.023，P=0.007），与年龄和是否绝经无明显相关性（P=0.344，P=0.144）。过表达FOXO1或抑制miR-96-5p表达后，Ishikawa细胞活力明显降低（P<0.05）、侵袭细胞数减少（P<0.01），cyclin D1、Vimentin蛋白表达水平明显降低，而cleaved PARP、p21蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较，miR-96-5p组Ishikawa细胞活力明显升高（P<0.05）、侵袭细胞数增加（P<0.01），Cyclin D1、Vimentin蛋白表达水平明显升高，而cleaved PARP、p21蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与miR-96-5p组比较，过表达FOXO1可明显逆转miR-96-5p对Ishikawa细胞活力和侵袭的促进作用（P<0.05）。miR-96-5p靶向并负调控FOXO1的表达 （P<0.05）。结论miR-96-5p可通过靶向负调控FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭。
