多种分离纯化大鼠胰岛细胞的实验方法比较

Abstract

【目的】采用不同的分离或消化方法, 探讨如何提高大鼠胰岛细胞分离纯化后的收获量和质量。【方法】将25 只 供体SD 雄性大鼠依胰腺分离或消化的方法不同随机地分为5 组:①A 组:胆总管灌注胶原酶P ;②B 组:胆总管灌注Hanks 液;③C 组:胆总管不灌注液体;A、B 、C 3 组胰腺直接分次消化;④D 组:胆总管不灌注, 胰腺剪碎后分次消化;⑤对照组:胆总 管灌注胶原酶P, 胰腺直接单次消化。将分离的胰岛沉淀物用Ficoll-400 纯化并培养, 再把胰岛细胞移植于糖尿病裸鼠受体腹 腔内。【结果】纯化后的胰岛细胞在收获量上A 和B 组明显多于对照组或C 组, 而D 组最低;A、B 和D 3 组的纯度均高于对 照组或C 组;在胰岛成活率方面, A 、B 、C 3 组均高于对照组或D 组。移植于糖尿病裸鼠受体内的大鼠胰岛细胞均可逆转高血 糖状态。【结论】经胆总管灌注胶原酶后的大鼠胰腺用分次消化的方法可提高胰岛细胞的收获量、纯度和活性。