Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín (Dec 2006)
Aplicación de una técnica de Cromatografía de Exclusión molecular para la purificación de ADN en plantas de Coffea sp. APPLICATION OF A TECHNIQUE OF MOLECULAR EXCLUSION CHROMATOGRAPHY FOR THE PURIFICATION OF DNA FROM Coffea sp. PLANTS
Abstract
Uno de los mayores inconvenientes en la extracción y purificación de biomoléculas a partir de plantas del género Coffea, es un alto contenido de polifenoles y compuestos tánicos. En el presente artículo se describe una metodología que permite obtener ADN de alta pureza. La extracción del ADN del homogeneizado de tejido foliar en siete genotipos de Coffea sp., se realizó mediante la técnica citada por Chaparro (1993) y su purificación se logró mediante cromatografía de exclusión molecular sobre una fase estacionaria de Sephacryl S-1000. Los resultados muestran que la alta eficiencia de separación de ARN degradado, proteínas, pigmentos y compuestos que absorben entre 220 y 300 nm, permiten obtener un ADN de alta pureza a juzgar por los datos espectrofotométricos y electroforéticos.One of the greatest difficulties in extracting and purifying biomolecules from plants in the genus Coffea is the high polyphenol and tannin contents. In this study a methodology is described that allows obtaining high purity DNA from leaf tissues of seven genotypes of Coffea sp. by means of the technique desribed by Chaparro (1993) and its further purification was achieved by molecular exclusion chromatography on Sephacryl S-1000 (Pharmacia). The results showed that the high separation efficiency of degraded RNA, proteins, pigments, and other compounds that absorb between 220 and 300 nm allowed obtaining high purity DNA as judged by the spectophometric and electroforetic data.
