Development of a duplex PCR for the identification of Fasciola hepatica in lymnaeid snails

Abstract

Fasciola hepatica es un parásito trematodo que causa fasciolosis, una enfermedad que afecta al ganado doméstico y al ser humano. El complejo ciclo de vida de F. hepatica involucra a los caracoles lymnaeidos como huéspedes intermediarios. La detección de F. hepatica en caracoles es una herramienta útil para el control de la fasciolosis en el ganado. Los métodos de detección implican el aplastamiento de los caracoles y la observación microscópica, pero tienen baja sensibilidad y consumen mucho tiempo. Para superar estas desventajas, se encuentran en desarrollo métodos de diagnóstico molecular. En este trabajo, se desarrolló una PCR dúplex que permite la detección de F. hepatica en caracoles como dos bandas simples y brillantes: una banda corresponde al parásito y otra al caracol, funcionando esta última como control interno para detectar inhibidores de la PCR. Para evitar resultados falsos positivos, también evaluamos el método de desinfección del material utilizado para la manipulación de caracoles. La PCR dúplex desarrollada mostró una sensibilidad lo suficientemente alta como para detectar un solo miracidio por caracol y acortó significativamente el tiempo de trabajo de análisis de una gran cantidad de caracoles.

Keywords

• fasciolosis
• digeneo
• huésped intermediario
• lymnaea sp
• identificación por pcr