مجله دانشگاه علوم پزشکی سبزوار (Apr 2015)
کلون‌کردن اپیتوپ‌های خطی آنتی‌ژن Eg95 اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP وبررسی بیان آن در سلول CHO
Abstract
زمینه و هدف: کیست هیداتیک، بیماریی است که ازطریق تخم انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس دفع‌شده از مدفوع سگ آلوده به انسان و دام منتقل‌می‌شود. این انگل، یکی از کرم‌های نواری خانواده‌ی Taeniidae می‌باشد که باعث ایجاد مشکلات بهداشتی گسترده در انسان و خسارت‌های اقتصادی به صنعت دامپروری می‌شود. بدین منظور، طراحی واکسن به‌منظور پیشگیری ازبروز این بیماری حائز اهمیت می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این تحقیق، توالی‌های کدکننده‌ی اپیتوپ خطی تحریک‌کننده‌ی سلول‌های T، سنتز و در محل برش XhoI در وکتور pEGFP-N1 کلون‌شد. وکتورهای نوترکیب توسط شوک الکتریکی به سلول‌های CHO ترانسفورم‌شدند و بیان پروتئین مورد نظر به‌صورت فیوژن با پروتئین سبز فلورسنت توسط میکروسکوپ فلورسنت مورد بررسی قرارگرفت. یافته‌ها: صحت کلونینگ باروش PCRمستقیم بر روی کلونی و درنهایت با روش توالی یابی تایید گردید. بیان پپتید فیوژن با GFP توسط میکروسکوپ فلورسنت مورد بررسی قرارگرفت. نتیجه‌گیری: نتایج این تحقیق نشان‌می‌دهد که اپیتوپ‌های خطی آنتی‌ژن Eg95کلون‌شده در وکتور pEGFP و در سلول CHO بیان-گردیده‌است. در ادامه می‌بایست این سازه DNA به حیوان مدل (موش) تزریق‌شده و پاسخ ایمنی حیوان مورد بررسی قرارگیرد.
