Renovação parcial do meio de cultura como perspectiva de aumentar a eficiência de um sistema de cocultoura de embriões sem fluxo contínuo de CO2 Partial replacement of the culture medium in order to enhance a embryos coculture system without continuous CO2 flow

Abstract

Substituindo-se parcialmente (30%) os meios de cultura TC M 199/NaHCO3 (199/NaHCO3) e TC M 199/25mM HEPES (199/HEPES) a intervalos de 24, 48 ou 72 horas, testou-se a possibilidade de incrementar a obtenção de blastocistos expandidos (BLE) a partir de embriões Mus musculus no estádio de duas células incubados sem fluxo contínuo de CO2. Após distribuição aleatória dos embriões em tubos de ensaio contendo 2ml de meio de cultura e monocamada celular de oviduto bovino, os referidos tubos foram hermeticamente fechados e colocados em estufa bacteriológica a 37°C durante 96 horas. A renovação do meio de cultura em qualquer período não incrementou a porcentagem de embriões que alcançou o estádio de BLE, todavia, o número total de BLE obtido com o 199/HEPES (79,0%) foi superior (P £ 0,01) ao verificado com o 199/NaHCO3 (65,0%).It has been evaluated, in a coculture system without continuous CO2 flow, the possibility to enhance the percentage of blastocists obtained from two cells mouse embryos by partial (30%) replacement (each 24, 48 and 72 hours of intervals) of two culture media (TCM 199/NaHCO3 and TCM 199/25 mM HEPES). The embryos, randomiy allocated in closed cultures tubes with 2 ml of medium and bovine oviduct monolayer, were maintained at 37°C during 96 hours. No diferences between spreaded blastocists were verifica when the media were replaced at ali intervals, however, the medium TCM 199/25mM HEPES was significantiy more effective (P £ 0.01) then TCM 199/NaHCO3.

Keywords

• cocultura
• meio de cultura
• embrião
• coculture
• culture medium
• embryo