Salud Pública de México (Dec 2001)
Evaluation of genotoxic activity of maleic hydrazide, ethyl methane sulfonate, and N-nitroso diethylamine in Tradescantia Evaluación de la genotoxicidad de hidrazida málica, N-nitroso dietilamina, y etil metano sulfonato, en núcleos de Tradescantia, por medio de la prueba del cometa
Abstract
Objective. To assess the genotoxic activity of N-nitroso diethylamine (NDEA), maleic hydrazide (MH), and ethyl methane sulfonate (EMS) using two systems: the comet assay on nuclei from Tradescantia, and the pink mutation test on Tradescantia staminal hairs (clone 4430). Material and Methods. Tradescantia cups was obtained from Laboratorio de Citogenética y Mutagénesis del Centro de Ciencias de la Atmósfera de la Universidad Nacional Autónoma de México and treated with: N-nitroso diethylamine (NDEA) at 1, 5, 10 mM, maleic hidrazide (MH) at 1, 5, 10 mM and ethyl methane sulfonate (EMS) at 15, 30 and 45 mM; and used in both pink mutation assay and comet assay using cellular nuclei from Tradescantia staminal hairs. The observation of staminal hair was realized along eight days (6-14) after treatment), flowers produced day 14 after treatment were utilized done according to Underbrink. In previous reports on plants, were comet assay was used, breaking cellular wall and separating by centrifugation gradient are necessary. Here, nuclei from staminal hairs were obtained by squashing the cells (is not necessary to utilize to break special procedure cellular wall), collected using a nylon mesh of 80Mm and next the comet assay was applied. Student's T test was the statistical test used for analyzing the comet assay data. Results. Both assays showed a great sensitivity to the studied mutagens. A relationship between the dose-pink event and the dose-tail length was evident. Even though the Tradescantia mutation assay is a sensitive test with MH and EMS, low doses of NDEA were not able to induce a significant increase in the pink event frequencies; however, the comet assay was able to detect the mutagenic effect of NDEA at the same dose. Thus, it is clear that the comet assay is highly sensitive to the lowest dose of chemical mutagens. Conclusions. The comet assay on nuclei from Tradescantia staminal hairs is a useful tool to monitor genotoxic agents; it is simple, highly sensitive, and faster than the pink mutation test. The English version of this paper is available too at: http://www.insp.mx/salud/index.html Objetivo. Evaluar la genotoxicidad de N-nitroso dietilamina (NDEA), hidrazida málica (MH) y etil metano sulfonato (EMS), en núcleos de Tradescantia (clona 4430) por medio de la prueba del cometa y de la prueba de mutación rosa, en los pelos estaminales de la misma planta. Material y métodos. Las plantas de Tradescantia (clon 4430) fueron obtenidas del Laboratorio de Citogenética y Mutagénesis del Centro de ciencias de la Atmósfera de la Universidad Nacional Autónoma de México, tratadas con NDEA a 1, 5, 10 mM, MH a 1, 5, 10 mM y EMS a 15, 30 y 45 mM, y utilizadas en la prueba de mutación rosa y en la del cometa, en núcleos celulares de los pelos estaminales. En la primera, la lectura de los pelos estaminales se realizó de acuerdo con el método de Underbrink. En otros estudios, que han aplicado la prueba del cometa en plantas, existe la necesidad de romper la pared celular y separar los núcleos por gradiente de centrifugación; en este caso, los núcleos de las células de los pelos estaminales fueron extraídos por aplastamiento sin aplicar un procedimiento especial para romper la pared, colectados por filtración en una malla de nylon y sometidos a la prueba del cometa. La prueba t de Student se usó para analizar los datos obtenidos. Resultados. Ambas pruebas presentaron una gran sensibilidad a los mutágenos estudiados y hubo una relación evidente dosis-eventos rosa / longitud de la cauda. Aunque la prueba de mutación rosa en Tradescantia fue muy sensible a MH y EMS, no se detectaron dosis bajas de NDEA; en cambio, la prueba del cometa en la misma planta permite detectar fácilmente la actividad de todos los agentes estudiados. Conclusión. La prueba del cometa en los núcleos de las células de los pelos estaminales de Tradescantia es una útil herramienta para los estudios de monitoreo. Además, es simple, sensible y más rápida que la prueba de mutación rosa en la misma planta. El texto completo en inglés de este artículo también está disponible en: http://www.insp.mx/salud/index.html
