Basic and Clinical Andrology (Apr 2021)
miR-122-5p regulates the tight junction of the blood-testis barrier of mice via occludin
Abstract
Abstrait Contexte La protéine occludine est. la principale protéine d’assemblage des jonctions serrées (JS), et la base structurelle pour la formation de ces jonctions entre les cellules de Sertoli dans l’épithélium séminifère. L’expression de miR-122-5p et de l’occludine sont négativement corrélées. Afin d’étudier le mécanisme de régulation de l’occludine et des TJ par miR-122-5p, nous avons, dans la présente étude, isolé des cellules primaires de Sertoli de souris C57BL/6, identifié un facteur de transcription de miR-122-5p dans le testicule, étudié les loci de miR-122-5p modulants l’occludine par le biais d’un système rapporteur à 2 luciférases, analysé la régulation de miR-122-5p sur l’expression de l’occludine par qRT-PCR et Western blot, et étudié l’effet de miR-122-5p sur les jonctions serrées à l’aide d’un Système de Résistance Electrique Millicell. Résultats L’activité relative de la luciférase dans le groupe du promoteur de pcDNA46 Sp1 + pGL3-miR-122-5p était significativement plus élevée que celle observée dans le groupe pcDNA-Sp1 + pGL3-basique, ce qui suggère que le facteur de transcription Sp1 favorise la transcription de miR-122-5p. L’activité relative de la luciférase dans le groupe 3′-UTR (wt) + miR-122-5p mimant l’occludine était significativement inférieure à celle des autres groupes (p < 0,01), ce qui indique que miR-122-5p module l’expression de l’occludine via la séquence ACACTCCA en 3′ UTR de l’occludine. Les niveaux d’ARNm et de protéine occludine dans le groupe mimant miR-122-5p étaient significativement inférieurs à ceux des autres groupes (p < 0,05), ce qui indique que miR-122-5p inhibe l’expression de l’occludine. La résistance transépithéliale du groupe mimant miR-122-5p était significativement inférieure à celle du groupe témoin vierge après le jour 4 (p < 0.05), ce qui indique que miR-122-5p inhibe in vitro l’assemblage des jonctions serrées de la barrière de perméabilité inter-Sertolienne. Conclusions Ces résultats montrent que miR-122-5p pourrait réguler les jonctions serrées via l’axe Sp1-miR-122-5p-occludine.
Keywords
