سلول های بنیادی عصبی مغز ماهی قره برون (Acipenser persicus): تعیین درجه حرارت بهینه، کشت طولانی مدت و ایمنوسیتوشیمی

Abstract

کشت سلولی مغز ماهیان دارای پتانسیل بالایی در بررسی واکنش‌های مختلف به مواد سمی، نوترینت‌ها و عوامل رشد می‌باشند. در این تحقیق، به منظور بررسی امکان تهیه کشت طولانی مدت از مغز تاس ماهی ایرانی، شناسایی سلول های بنیادی عصبی و تعیین درجه حرارت بهینه رشد سلول ها، بخش‌های جلویی (لوب بویایی)، میانی (لوب بینایی) و عقبی (مخچه) مغز تاس ماهی ایرانی به طور مجزا در محیط DMEM/F12 حاوی FBS٪۱۵، پنی سیلین-استرپتومایسین و آمفوتریسین در انکوباتور (۲۵ درجه سانتی-گراد، CO2٪۵) قرار داده شدند. سلول‌های به‌دست آمده غالبا دوکی شکل بودند. در بین سلول‌های کشت داده شده از بخش‌های مختلف مغز، سلول‌های بخش عقبی مغز پس از طی بیش از ۸ ماه و ۹ پاساژ همچنان به رشد و تکثیر خود ادامه می‌دهند. به منظور تعیین درجه حرارت بهینه رشد سلول‌های مغز تاس ماهی ایرانی، سلول‌ها در درجه حرارت‌های ۲۰، ۲۲، ۲۵ و ۲۸ درجه سانتی‌گراد قرار گرفته و تعداد سلول ها در هر تیمار دمایی جهت ارزیابی شرایط رشد بررسی گردید. بالاترین رشد سلول‌ها در شرایط آزمایشگاهی در درجه حرارت ۲۵ درجه سانتی‌گراد مشاهده گردید. به منظور حفظ ذخیره سلولی، کشت‌های به‌دست آمده در ازت مایع منجمد شدند. به‌منظور شناسایی سلول‌های بنیادی عصبی، واکنش پذیری سلول‌های حاصل از کشت بخش عقبی مغز با مارکر آنتی نستین بررسی گردید که در این میان، ٪۱۱ سلول‌ها واکنش مثبت نشان دادند. با توجه به پایداری بالای کشت های به دست آمده از ناحیه عقبی مغز، می توان از آن در زمینه های تحقیقاتی مختلف همچون شناسایی ویروس، اکوتوکسکولوژی و بیان ژن استفاده نمود.

Keywords

• آمفوتریسین
• پاساژ
• درجه حرارت بهینه
• ماهی قره برون