TNFR1／RANK嵌合体的构建及其在研究破骨细胞分化中的意义

Abstract

【目的】构建肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）膜外部分和核转录因子NF-κB受体激动剂（RANK）跨膜及膜内部分相结合的嵌合体，探讨其在破骨细胞（OC）分化中的意义。【方法】克隆TNFR1／RANK嵌合体的cDNA，用plat E将其包装成逆转录病毒。通过感染将这种逆转录病毒转染到敲除TNFRl／R2基因的小鼠（TNFR1-／R2-）骨髓巨噬细胞（BMM）中；用TNFQ刺激，分别观察OC的分化及骨的重吸收能力；用Western Blot方法证实TNFR1／RANK是通过NF-κB、JNK、P38和ERK蛋白的磷酸化来调节OC的分化和功能。【结果】在TNFa刺激下，BMM能分化成OC，而且分化出的OC能明显地导致骨质破坏。TNFQ刺激BMM5min后磷酸化的NF-κB、JNK、P38和ERK蛋白的表达明显增强。【结论】TNFR1／RANK嵌合体具有完整的分子结构和生物功能，可作为研究RANK结构、功能及其信号途径的一个简便、有效的生物工具。

Keywords

• TNFR1／RANK;嵌合体;破骨细胞;分化;克隆