AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTITUMORAL DO LÁTEX DE EUPHORBIA UMBELLATA

Abstract

Objetivos: Determinar a concentração inibitória mínima (IC50) de linhagens tumorais hematológicas e de linfócitos humanos saudáveis (PBMCs) a partir do látex liofilizado da Euphorbia umbellata, bem como seu índice de seletividade (SI), a fim de avaliar se a planta em questão possui atividade antitumoral. Material e métodos: Células Jurkat, Raji e K-562 foram plaqueadas (1 × 105 células/poço) em triplicatas biológicas e tratadas com o látex liofilizado da E. umbellata (800 μg/mL; 400 μg/mL; 200 μg/mL e 100 μg/mL) por 24h. Após esse período, elas foram marcadas com 7-AAD. O mesmo protocolo foi realizado com PBMCs, a partir da coleta do sangue periférico de 6 pacientes saudáveis em tubo de heparina. As amostras foram processadas com Ficoll-Paque® (1,078 g/mL) na razão 1:2, com separação por gradiente de densidade para obtenção de PBMCs. A quantificação de morte celular em ambos os experimentos foi realizada em citômetro de fluxo BD FACS Canto II™, com aquisição e análise de 10.000 eventos por meio do software Diva 6.0 (BD Biosciences). As curvas do IC50 para todas as linhagens celulares testadas foram realizadas por regressão não-linear, utilizando o software Graphpad Prism® 9 (versão 8.0.2). Por fim, o SI foi obtido a partir da razão entre o IC50 de PBMCs e o IC50 das células neoplásicas. Adicionalmente, foi realizado o screening fitoquímico do látex da planta, efetuando-se os testes de: cumarinas, alcaloides e taninos. Resultados: Foram obtidos os valores de IC50 para células Jurkat, Raji, K-562 e PBMCs, respectivamente: 41,76 μg/mL; 58,19 μg/mL; 184,4 μg/mL; e 59,27 μg/mL. Ainda, os valores do SI obtidos foram: 1,41 (Jurkat); 1,01 (Raji) e 0,32 (K-562). Quanto às análises fitoquímicas, pela metodologia utilizada, observou-se a presença de alcaloides no látex, e não foram identificados fenois, taninos e cumarinas. Discussão: Ao comparar os valores de IC50 das linhagens tumorais e de PBMCs, constatou-se que as células Jurkat apresentam sensibilidade relevante ao látex de E. Umbellata, uma vez que a dose da droga que mata 50% dessas células permite a viabilidade de mais de 50% dos linfócitos humanos. Por outro lado, células K-562 demonstraram uma maior resistência à morte induzida pelo tratamento, sendo a linhagem menos sensível e promissora, visto que seu valor de IC50 seria tóxico para os linfócitos humanos saudáveis. Células Raji, por sua vez, obtiveram um valor de IC50 inferior ao obtido para PBMCs, entretanto, são valores próximos, o que não permitiria uma janela terapêutica segura. Além disso, foi possível constatar que o tratamento com o látex da E. Umbellata é dose-dependente, uma vez que doses maiores levaram a uma maior morte celular. Assim, a dose do medicamento está diretamente relacionada a atividade por ele desempenhada. Ainda, os valores de SI confirmam que a Jurkat é a linhagem mais sensível e promissora ao tratamento, ao passo que que valores maiores que 1 denotam que uma droga é mais ativa contra a linhagem neoplásica do que contra células saudáveis. Conclusão: Foi possível observar que a linhagem Jurkat demonstra-se sensível e promissora em relação ao tratamento, obtendo-se um intervalo terapêutico seguro. Por outro lado, células K-562 demonstraram maior resistência à morte celular. Assim, foi possível constatar que o látex em questão é linhagem-seletivo, apresentando citotoxicidade diferente em relação às linhagens celulares em questão.