建立doxycycline 诱导表达Xaf1 的肿瘤细胞株

Abstract

【目的】为探索XIAP 相关因子1( Xaf1) 调节肿瘤细胞凋亡的机制, 利用基因开关调节系统( Teton) , 拟建立由doxycycline 调控表达的Xaf1 诱导细胞株。【方法】将pTREHA-Xaf1 和pWZL-Hyg 质粒用基因 转染技术转入稳定表达rtTA 的Saos-2 细胞中。经过hygromycin 的抗性筛选, 挑出并扩增表达Xaf1 的细胞株。 在8 例实验组中加入doxycycline, 和不加doxycycline 的8 例对照组比较, 重复3 次实验用免疫印迹法和免疫 荧光显微镜检测doxycycline 对Xaf1 表达的调控。Xaf1 诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA 含量来表示。【结 果】在30 个抗hygromycin 的细胞株中, 免疫印迹法筛选出5 个明显由doxycycline 调控诱导表达Xaf1 的细胞 株, 免疫荧光显微镜检测显示doxycycline 诱导Xaf1 表达于细胞核内。流式细胞检测Xaf1 于8h 开始诱导Saos 细胞凋亡, 凋亡率最高约20%, 而且不影响细胞周期。【结论】Xaf1-Saos 诱导细胞株是研究Xaf1 调节肿瘤细 胞凋亡机制的良好细胞模型; Xaf1 是一种核蛋白, 能独立诱导肿瘤细胞凋亡。