بیان ژن VP2 ویروس کلاسیک D78 بورس عفونی بصورت پروتئین ترشحی در مخمر پیشیاپاستوریس

Abstract

بیماری بورس عفونی، یکی از مهمترین بیماریهای ویروسی جوجه های صنعتی است. برای پیشگیری از بیماری، استفاده از واکسنهای معمول مرسوم است که با توجه به برخی محدودیتهای این واکسنها، در سال های اخیر بکارگیری واکسنهای نوترکیب در پیشگیری از این بیماری مورد توجه قرار گرفته است. در این خصوص بیان ژنهای پروتئین های ایمنی زا در سیستم مخمر پیشیا پاستوریس به شکل ویژه مورد نظر می باشد. در این مطالعه ژن VP2 از ویروس کلاسیک واکسینال D78 بوسیله روش RT-PCR تکثیر گردید و سپس در ناقل ترشحی pPICZαA کلون گردید و پس از آن مخمر پیشیا پاستوریس(سویه KM71H)توسط روش الکترو پوریشن بوسیله کلون مزبور ترانسفورمه شد. سپس کلونی های مخمر نوترکیب در یک « محیط غذایی مینیمال» تکثیر یافتند و بدین شکل پروتئین نوترکیب VP2 به جهت ترشحی بودن ناقل پلاسمیدی در مایه رویی بوسیله روش SDS-PAGE و Western blot شناسایی گردید. میزان بیان این پروتئین نو ترکیب 67/. میلی گرم در لیتر گزارش گردید. بیان پروتئین های ایمنی زا مانند VP2 در مخمر پیشیا پاستوریس به عنوان یک روش ساده، سریع و ارزان توصیه می گردد و با انتخاب کلون های مخمری مناسب تر و استاندارد نمودن پارامترهای مختلف کشت مخمری، میتوان میزان بیان این پروتئین ترشحی نوترکیب را افزایش داد.

Keywords

• پیشیا پاستوریس
• بیان ژن VP2
• پروتئین ترشحی نوترکیب