AVALIAÇÃO DA INFLUÊNCIA DAS CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES NA PROLIFERAÇÃO DE LINHAGENS CELULARES JAK2V617F+ MUTADAS

Abstract

Introdução: As neoplasias mieloproliferativas (NMP) BCR-ABL1-negativas clássicas caracterizam-se pelo aumento da proliferação de células mieloides precursoras e maduras. Nesse estudo, foi avaliado o efeito das células mesenquimais multipotentes (MSC) normais (HS-5), na proliferação da linhagem celular HEL 92.1.7 JAK2V617F+. As células mesenquimais constituem uma população de células não hematopoéticas presentes no nicho da medula óssea. As MSC proporcionam o microambiente medularideal para a célula tronco hematopoética manter seu potencial de auto-renovação e as protegem de estímulos pró-apoptóticos, além de desempenharem um papel imunoregulador. Material e métodos: Células da linhagem HEL 92.1.7 JAK2V617F positiva (ATCC®TIB-180 ™), provenientes de paciente com policitemia vera que progrediu para leucemia mieloide aguda foram cocultivadas com células HS-5. As MSCna concentração de 5x10 4 células por poço foram plaqueadas em placas de 6 poços, seguido da adição de 1x10 5 células HEL.92.1.7 por poço, marcadas com o fluorocromocell-trace violet (CTV). Um milhão e duzentas mil células foram marcadas com 1μL deCTV, por 30 minutos a 37°C na ausência de luz. Em seguida o CTV não ligado foiinativado pela adição de 5 mL de meio RPMI com 10% de soro bovino fetal seguidapela centrifugação das células a 400 x g por 5 minutos e o precipitado celular foiressuspenso em meio RPMI. O cocultivo foi realizado por 24, 48 e 72 horas. Aproliferação das células HEL.92.1.7 foi analisada pela diminuição da fluorescência doCTV, por meio da análise em citômetro de fluxo (FACSCanto, BD). Resultados: Osresultados observados indicam que as células HEL.92.1.7 cultivadas na presença da HS-5 proliferaram menos do que células cultivadas sem a interação com as célulasmesenquimais HS-5 nos tempos de 24, 48 e 72 horas (p = 0,0004; p = 0,0185; p = 0,0224, respectivamente). Discussão: As células mesenquimais parecem desempenhar um papelimunossupressor sobre as células JAK2V617F positivas, diminuindo sua proliferaçãocelular. Conclusão: As células estromais mesenquimais multipotentes representam uma ferramenta atraente para reduzir a resposta e proliferação de células positivasJAK2V617F. Financiamento: CAPES (código 001), CNPq and FAPESP (2018-01756-5;2018/19714-7). Palavras chave: neoplasias mieloproliferativas, células estromais mesenquimaismultipotentes, HEL 92.1.7, mutação JAK2V617F, proliferação celular.