NESTED-PCR VS RT-QPCR: UMA COMPARAÇÃO DA SENSIBILIDADE NA DETECÇÃO DE ALTERAÇÕES GENÉTICAS EM PACIENTES COM LEUCEMIAS AGUDAS

Abstract

Objetivo: Diante da importância da detecção de alterações genéticas em pacientes com leucemias, o objetivo desse estudo foi comparar a sensibilidade das técnicas Nested -PCR e RT-qPCR na detecção de alterações genéticas em pacientes portadores de leucemias agudas. Metodologia: Aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (nº4.798.575), este estudo incluiu amostras de sangue periférico e medula óssea de 117 pacientes atendidos no Hospital Geral de Fortaleza (HGF). Após a obtenção dos respectivos diagnósticos de leucemia mieloide aguda e leucemia linfoblástica aguda, todas as amostras foram submetidas a análises qualitativas através da técnica de Nested -PCR e de expressão quantitativa através da técnica de RT-qPCR. Os pacientes com LMA foram submetidos à análise das seguintes alterações: FLT3-ITD, RUNX1::RUNX1T1, CBFB::MYH11 e PML::RARA, enquanto foram pesquisadas as fusões BCR::ABL1, TCF3::PBX1, KMT2A::AFF1, ETV6::RUNX1 e SIL::TAL1 nas amostras dos pacientes com LLA. Resultados: Ao longo do estudo, foram diagnosticados 77 pacientes com Leucemia Mieloide Aguda (LMA) e 40 com Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), dos quais 35 correspondiam ao tipo B e 5 ao tipo T. Entre os 77 pacientes com LMA, foram detectados 4 pacientes com a mutação FLT3-ITD, 7 pacientes com a translocação RUNX1::RUNX1T1, 10 pacientes com a translocação PML::RARA e 1 paciente com a translocação CBFB::MYH11. A presença dessas alterações não foi detectada através da técnica Nested -PCR, porém foi possível realizar essa identificação através do método de RT-qPCR. Já entre os 40 pacientes portadores de LLA, observou-se a presença de 24 pacientes com a translocação BCR::ABL1 e 3 pacientes com a translocação TCF3::PBX1, através da metodologia RT-qPCR. Diferentemente das análises realizadas nas amostras de LMA, foi possível identificar a formação de bandas na pesquisa pelas fusões nas amostras de LLA. Entretanto, a alteração TCF3::PBX1 foi detectada pela Nested -PCR apenas em amostras de medula óssea dos pacientes, mesmo apresentando alta leucometria e taxas acima de 20% de blastos circulantes em sangue periférico. Discussão: O presente estudo demonstrou que a técnica de RT-qPCR apresentou uma sensibilidade maior em comparação à técnica de Nested -PCR no momento do diagnóstico das amostras de leucemias agudas estudadas. Isso também foi visto em outros trabalhos que demonstraram que a metodologia de RT-qPCR é mais sensível e rápida na detecção de diversas doenças quando comparada à Nested -PCR. A literatura traz resultados controversos em relação à Nested -PCR, já que alguns autores determinaram essa metodologia como um método confiável e com alta sensibilidade para o diagnóstico de diversas doenças, enquanto outros pesquisadores indicam a utilização de métodos mais eficientes como a RT-qPCR. No geral, a utilização da técnica Nested-PCR aparenta ser mais indicada em casos que o diagnóstico por PCR convencional simples não é o suficiente. Conclusão: Portanto, o estudo demonstrou que a técnica de RT-qPCR apresentou uma sensibilidade maior em comparação à técnica de Nested -PCR no momento do diagnóstico das amostras de leucemias agudas estudadas. A técnica de RT-qPCR se mostrou muito eficiente para o diagnóstico rápido e sensível de alterações genéticas em ambos os tipos de amostras analisadas no estudo, caracterizando uma grande vantagem, já que deixa de exigir coletas invasivas de medula óssea.