Factors affecting Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of broccoli

Abstract

Plantas transgénicas de brócoli fueron obtenidas por medio de Agrobacterium tumefaciens conteniendo los genes endoquitinasa, gus y nptII. Se analizaron los efectos del tipo y edad del explante, cepa de Agrobacterium y utilización de nitrato de plata en la eficiencia de transformación. Pecíolos- cotiledonares de plántulas de 5 días-post-germinación fueron exitosamente transformados con la cepa octopina LBA4404 o la cepa nopalina GV3101. No se obtuvieron brotes transformados de explantes provenientes de plántulas de 15 días post-germinación, ni de hipocotilos en ningún estado de desarrollo. Mayores tasas de transformación fueron obtenidas con GV3101 (11-16%), comparado con LBA4404 (1-6%). El aumento en las tasas de transformación también fue observado cuando los explantes fueron expuestos a nitrato de plata durante los primeros 7 días de selección, pero solamente cuando la cepa LBA4404 fue utilizada. El uso del nitrato de plata en explantes inoculados con GV3101 no incrementó la diferenciación de brotes. La selección por resistencia a kanamicina permitió la diferenciación de muchos escapes, pero brotes transgénicos también fueron obtenidos. La condición transgénica fue confirmada por análisis NptII y de PCR los cuales mostraron una fuerte correlación con la formación de raíz en medio de selección.