Odontoestomatología (Sep 2022)
Estudio de marcadores de estrés celular y parámetros metabólicos en un microambiente hipóxico in vitro en queratinocitos inmortalizados con los oncogenes virales del VPH-18
Abstract
Introducción: La hipoxia es una condición de deficiencia de oxígeno en las células de los tejidos que puede ocurrir en situaciones fisiopatológicas, como el cáncer (1,2). Por otro lado, el estrés oxidativo también es una característica frecuente del microambiente tisular, y juega un papel clave en la fisiología de las células tumorales a medida que crecen y avanzan hacia el estroma (3). Ambos procesos están íntimamente relacionados, por lo tanto, ensayos que permitan visualizar simultáneamente el estado hipóxico y oxidativo de las células en condiciones de bajo nivel de oxígeno, podrían contribuir a modelar la interacción entre la hipoxia y el estrés oxidativo in vitro. Objetivos: Estudiar los niveles de hipoxia y estrés oxidativo simultáneamente en células HaCaT transducidas con los oncogenes del VPH-18 (HaCaT E5/E6/E7-18) (4) mediante la variante del método de hipoxia inducida por cubreobjetos (5). Evaluar el metabolismo de dichas células en condiciones de normoxia e hipoxia. Métodos: Se utiliza la variante del método de hipoxia inducida por cubreobjetos para generar gradientes de hipoxia intracelular en HaCaT E5/E6/E7-18. Para visualizar este gradiente se utiliza una sonda que detecta la hipoxia en células vivas. A su vez, es posible detectar en simultáneo niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) mediante el empleo de una sonda específica. Con el fin de medir la respiración y la acidificación en las células HaCaT E5/E6/E7-18 en relación a las células control, se utiliza el equipo “Seahorse XF24 Extracellular Flux Analyzer” de la Facultad de Medicina. Además, para estudiar los cambios metabólicos en condiciones de hipoxia en relación a normoxia, se miden cambios de pH y producción de CO2 mediante el Radiómetro ABL800 Flex del Hospital de Clínicas. Resultados y Discusión: Observamos niveles más altos de hipoxia en células alejadas de una fuente de oxígeno y un descenso en los niveles de estrés oxidativo. Además, observamos que las células HaCaT E5/E6/E7-18 presentan una mayor tasa de acidificación extracelular, y un mayor consumo de oxigeno en relación a las células control. Además, observamos que HaCaT E5/E6/ E7-18 en condiciones de hipoxia presentan una disminución de pH y un aumento en la presión de CO2 en relación a normoxia.
