Epstein-Barr 病毒DNA 多聚酶基因扩增和表达载体构建

Abstract

【目的】扩增Epstein-Barr 病毒(EBV)DNA 多聚酶基因, 构建高效表达载体。【方法】根据EBV 全基因序列, 在 EBV DNA 多聚酶基因的3′、5′端设计一对附加EcoRⅠ 和Hind Ⅲ 酶切位点的特异性引物, 以B95-8细胞DNA 为模板, 采用改良 PCR 方法扩增出EBV DNA 多聚酶基因(3 044 bp)。用EcoRⅠ 和Hind Ⅲ 酶切该基因片断并克隆至表达载体pMAL-p2, 采用 蓝白斑试验筛选阳性菌落。EcoRⅠ 和Hin dⅢ 酶切分析、鉴定重组体pEBP。【结果】通过电泳鉴定, PCR 产物为3 044 bp, 与 EBV DNA 多聚酶基因大小一致。经蓝白斑试验及限制性DNA 内切酶分析, 成功地筛选到EBV DNA 多聚酶基因重组表达质 粒pEBP。【结论】本实验成功地扩增出完整EBV DNA 多聚酶基因, 并构建了高效表达重组体, 为进一步在体外表达、制备 EBV DNA 多聚酶蛋白奠定了基础。