Evaluación de la Dúplex PCR para el diagnóstico simultáneo de Mycobacterium spp. y Brucella spp. en bovinos

Abstract

La tuberculosis y la brucelosis siguen siendo causas importantes de morbilidad y mortalidad en muchos países, para la detección de ambas enfermedades se requieren de herramientas eficientes y sensibles para efectivizar el diagnóstico. Este trabajo fue diri gido a evaluar y comparar la técnica de Dúplex PCR frente a la PCR anidada, para la detección de Brucella spp. (BR) y Mycobacterium spp. (TB). Se utilizó un total de 100 muestras de tejidos a partir de nódulos linfáticos traqueo bronquiales, pulmón de bovi nos y, aislados bacterianos de TB y BR como controles positivos. Diez combinaciones de iniciadores dirigidos a flanquear un segmento de la secuencia 16S ARNr (BR) y el gen antígeno MPB70 (TB) fueron evaluados, el mejor resultado para la Dúplex PCR se logró con los iniciadores Bru - 2F/Bru - 2R para BR y para TB, Tub - 1F/Tub - N - R. Los productos de amplificación fueron de 225 y 230 - pb respectivamente. A fin de potencializar los resultados de la técnica propuesta, todas las muestras fueron inicialmente analizadas y comparadas entre la PCR simple y la PCR anidada (Kappa, k = 0,85) y, la concordancia entre los resultados obtenidos con la PCR anidada y la Dúplex PCR (k = 0,88), para las dos bacterias fue muy buena.