PIM447, NOVO INIBIDOR DE PROTEÍNAS PAN-PIM QUINASES, TEM MÚLTIPLOS EFEITOS NA LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA ATRAVÉS DA VIA HGF

Abstract

Objetivos: PIM-quinases, associadas à progressão de cânceres induzidos pelo fator de crescimento de hepatócitos (HGF) por meio de seu receptor, MET, interagem com a serina protease tipo kunitz-2 (SPINT2), no microambiente tumoral (TME) e sua interação pode representar uma importante estratégia terapêutica multialvo na leucemia mieloide aguda (LMA). Analisamos a interação entre SPINT2, HGF e pan-PIM quinases avaliando a expressão gênica e os efeitos de um inibidor de pan-PIM quinase, PIM447 (Novartis), em células leucêmicas e no TME. Métodos: Expressão de mRNA foi obtida do estudo OHSU (2018) e TCGA (cBio Portal). A análise de correlação foi obtida pelo coeficiente de Spearman (r). Células mesenquimais estromais (MSC) da medula óssea (BM) de 5 doadores saudáveis (HD) e 5 pacientes com LMA foram tratadas com 5-Azacitidina (Aza). OCIAML3, MOLM13, U937, RS4;11, Jurkat foram tratadas com PIM447 e as taxas de apoptose foram determinadas. Sangue periférico e células mononucleares (MC) da BM (PBMC/BMMC) de HD foram testados quanto à citotoxicidade. Células leucêmicas foram examinadas para espécies reativas de oxigênio (ROS), produção de óxido nítrico (NO) e potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm). Foram realizadas coculturas de células de leucemia com monócitos/macrófagos derivados de monócitos (MDMs) ou MSC com SPINT2 superexpresso. Estatística foi realizada por Kruskal Wallis, ANOVA ou Mann-Whitney (p < 0,05). Resultados: A expressão gênica de 188 pacientes com LMA mostrou que os níveis de HGF correlacionaram-se positivamente com PIM1/PIM2/PIM3 ((r) =,8727;.9094;.9093), p <,0001) e negativamente com SPINT2. Aza regulou positivamente a expressão do SPINT2 em AML-BMMSC (p <,05). PIM447 reduziu a viabilidade e aumentou a apoptose em células leucêmicas [IC50: 12,2-22,2μM, p <,01] sem afetar as células HD e reduziu a produção de ROS, NO e ΔΨm (p <,0001). PIM447 promoveu em MDMs uma população diminuída de M2 e aumentada de M1 (p <,05), além de causar apoptose de células leucêmicas nas co-culturas (p <,0001). MSCs com SPINT2 superexpresso aumentaram a atividade citotóxica de PIM447 em células de leucemia e reduziram a adesão célula-célula diminuindo CD49b, CD49d e CD49e (p <,05). Conclusão: PIM447 atua no microambiente de suporte tumoral, além de interagir com a via SPINT2/HGF no TME, reduzindo a progressão da LMA. Esses achados sugerem que uma estratégia fundamental para tratar a LMA pode ser uma terapia multialvo, atuando tanto nas células leucêmicas quanto no microambiente tumoral. Suporte: FAPESP #2017/21801-2, #2019/25247-5, #2021/05320-0; CNPq #303405/2018-0.