双氢睾酮体外培养人毛囊中差异表达的miR-133b对人毛乳头细胞的增殖及诱导能力的影响

Abstract

目的探究不同浓度双氢睾酮（DHT）对毛囊生长和毛囊细胞增殖的影响及其与miR-133b表达的关系，然后进一步探究miR-133b对毛乳头细胞的增殖和诱导能力的影响。方法体外显微分离人毛囊，选取生长期的毛囊进行培养，显微镜下每日测量并拍摄不同浓度的DHT处理组（10-8、10-7、10-6 和10-5 mol/L）和对照组各组毛囊的生长长度，免疫荧光检测各组毛母质细胞Ki-67表达量评估毛囊增殖能力，qRT-PCR检测各组毛囊中miR-133b的表达量。通过Lipofectamine 2000转染miR-133b mimics及miR-133b NC至人毛乳头细胞中，CCK-8检测各组人毛乳头细胞增殖能力，qRT-PCR及Western Blot检测毛乳头细胞诱导能力指标Versican、ALP、β-catenin的mRNA及蛋白水平的相对表达量。结果与对照组相比，DHT 10-5 mol/L实验组对毛囊的生长的抑制作用有统计学意义（P<0.05），DHT 10-5 mol/L实验组进入退行期的时间提前；其他组生长长度与对照组相比无统计学意义。免疫荧光及qRT-PCR显示，与对照组相比，DHT 10-5 mol/L实验组毛母质细胞中Ki-67阳性细胞较少且毛囊中miR-133b的相对表达量明显升高，相当于对照组的（3.17±0.26）倍（P<0.01）。CCK-8显示，miR-133b mimics组OD450低于miR-133b NC组（P<0.05）；qRT-PCR显示，在mRNA水平，miR-133b mimics组Versican、ALP、β-catenin的相对表达量均低于miR-133b NC组（P<0.001、P<0.01和P<0.01）。Western blot显示，在蛋白水平，miR-133b mimics组Versican、ALP、β-catenin的相对表达量同样均低于miR-133b NC组（P<0.01、P<0.001和P<0.01）。结论高浓度DHT可能通过调控miR-133b的表达抑制人毛乳头细胞的增殖活性及诱导能力，最终抑制人毛囊的生长及增殖。

Keywords

• miR-133b;双氢睾酮;毛囊;毛乳头细胞