人肥胖基因在 pBV221 中的克隆及在大肠杆菌中的表达

Abstract

目的: 在大肠杆菌中高效表达人 leptin。方法: 根据中国人肥胖基因( obese gene, OB) cDNA 序列和高效表达质 粒 pBV221 的多克隆位点,设计 PCR 引物, 以含有人 OB 的重组质粒 pUC19OB 为模板, 体外扩增人 OB 编码 leptin 的片段 (OB 1) ,并经内切酶消化鉴定 。将带有一对限制性内切酶位点的 OB 1 和 pBV221 分别进行双酶切, 然后把 OB 1 定向克隆 于 pBV221 中。结果: 成功地构建了重组质粒 pBV221OB1, 实现了人 leptin 在大肠杆菌中的表达。结论: 采用定向克隆技术, 将 OB 1 插入表达质粒 pBV221, 连接效率高,且重组质粒中 OB 1 均为正向插入, 确保了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达。