Anais da Academia Brasileira de Ciências (Jun 2005)
Ouabain exacerbates activation-induced cell death in human peripheral blood lymphocytes
Abstract
Lymphocytes activated by mitogenic lectins display changes in transmembrane potential, an elevation in the cytoplasmic Ca2+ concentrations, proliferation and/or activation induced cell death. Low concentrations of ouabain (an inhibitor of Na+,K+-ATPase) suppress mitogen-induced proliferation and increases cell death. To understand the mechanisms involved, a number of parameters were analyzed using fluorescent probes and flow cytometry. The addition of 100nM ouabain to cultures of peripheral blood lymphocytes activated with 5µg/ml phytohemagglutinin (PHA) did not modify the increased expression of the Fas receptor or its ligand FasL induced by the mitogen. However, treatment with ouabain potentiated apoptosis induced by an anti-Fas agonist antibody. A synergy between ouabain and PHA was also observed with regard to plasma membrane depolarization. PHA per se did not induce dissipation of mitochondrial membrane potential but when cells were also exposed to ouabain a marked depolarization could be observed, and this was a late event. It is possible that the inhibitory effect of ouabain on activated peripheral blood lymphocytes involves the potentiation of some of the steps of the apoptotic process and reflects an exacerbation of the mechanism of activation-induced cell death.Quando linfócitos são ativados por lectinas mitogênicas apresentam mudanças do potencial de membrana, elevação das concentrações citoplasmáticas de cálcio, proliferação e/ou morte celular induzida por ativação (AICD). Concentrações baixas de ouabaína (um inibidor da Na,K-ATPase) suprimem a proliferação induzida por mitógenos e aumentam a morte celular. Para entender os mecanismos envolvidos, uma série de parâmetros foram avaliados usando sondas fluorescentes e citometria de fluxo. A adição de 100nM de ouabaína para culturas de linfócitos de sangue periférico ativadas por fitohemaglutinina (PHA) não modificou o aumento de expressão do receptor Fas ou de seu ligante FasL induzida pelo mitógeno. No entanto, o tratamento com ouabaína potenciou a apoptose induzida por um anticorpo anti-Fas funcionando como agonista. Um sinergismo entre ouabaína e PHA também foi observado com relação à despolarização da membrana plasmática. Com relação à membrana mitocondrial, PHA por si só não produziu despolarização, mas quando as células foram também expostas à ouabaina uma dissipação do potencial foi observado, mas isso foi um evento tardio. É possível que o efeito inibitório da ouabaína em linfócitos de sangue periférico ativados envolva a potencialização de alguns aspectos do processo apoptótico e reflita uma exacerbação do mecanismo de AICD.
Keywords
