ESTABELECIMENTO DE VALORES DE REFERÊNCIA PARA AGREGAÇÃO PLAQUETÁRIA POR SISTEMA ÓPTICO E SECREÇÃO DE ATP POR LUMINESCÊNCIA.

Abstract

Introdução: De acordo com a ISTH, a investigação da função plaquetária inclui o teste de agregação plaquetária por sistema óptico, com um número limitado de agonistas, seguido da avaliação da secreção do conteúdo dos grânulos densos. Atualmente é possível realizar simultaneamente os dois testes: agregação plaquetária e secreção de ATP por lumi-agregometria. Há tempos nosso serviço tem liberado os resultados de agregação plaquetária de forma qualitativa, e a interpretação dos níveis de ATP baseada nos valores de referência do fabricante.Entretanto, o estabelecimento de valores de referência locais pode melhorar a acurácia do exame. Objetivo: Determinar os valores de referência para os testes de agregação e secreção plaquetária de ATP, bem como seu impacto para o diagnóstico de disfunção plaquetária. Método: Incluímos adultos saudáveis sem uso de medicamentos que alterassem o metabolismo plaquetário nos 10 dias anteriores à coleta. O plasma rico em plaquetas foi ajustado para 250.000 plaquetas por mm3 com solução fisiológica e o agregômetro modelo 700 da Chrono-log foi utilizado. Os agonistas empregados foram: ácido araquidônico (0,5 mM), colágeno (2 μg/mL), epinefrina (5 μM e 10 μM), ADP (10 μM), trombina (1 U/mL), marca Chrono-Par®. Na luminescência os reagentes ATP padrão e luciferina-luciferase foram Chono-LUME®. Os valores de referência foram determinados pela média dos resultados e dois desvios padrão. Para validação, os resultados de agregação plaquetária obtidos por análise qualitativa (visual) foram comparados com os resultados obtidos utilizando os novos valores de referência (análise quantitativa) utilizando o teste ponderado de Kappa. Resultados: Para determinação dos valores de referência, foram incluídos 21 doadores, com mediana de idade de 40 anos (IIQ 30‒48), sendo 52% do sexo feminino. Para validação do teste, foram incluídos 76 resultados de agregação plaquetária obtidos entre 2022 e 2023. Os valores de referência para secreção plaquetária de ATP foram: ADP (10 μM) 0,38 a 2,01 nM, epinefrina (5 μM) 0,2 a 1,69 nM, epinefrina (10 μM) 0,07 a 1,83 nM, ácido araquidônico (0,5 mM) 0,66 a 1,83 nM, colágeno (2 μg/mL) 0,42 a 2,36 nM e trombina (1 U/mL) 0,30 a 2,32 nM. Os valores de referência obtidos para amplitude de agregação plaquetária foram: ADP (10 μM) 71% a 102%, epinefrina (5 μM) 68% a 109%, epinefrina (10 μM) 70% a 105%, ácido araquidônico (0,5 mM) 84% a 110% e colágeno (2 μg/mL) 78% a 106%. A comparação entre a análise quantitativa (utilizando valores de referência) e a análise qualitativa (visual) das curvas demonstrou uma concordância substancial para colágeno (κ = 0,615) e para epinefrina (κ = 0,741). Todos os resultados alterados na análise qualitativa foram confirmados pela análise quantitativa. Entretanto, a análise quantitativa foi capaz de identificar 20% a mais de resultados alterados para o colágeno e 13% a mais para a epinefrina. No total, a análise quantitativa identificou 26% a mais de casos de disfunção plaquetária em comparação com a análise qualitativa. Discussão/conclusão: Nossos resultados demonstram que a utilização de valores de referência para agregação plaquetária aumenta a sensibilidade deste ensaio. Dessa forma, evidenciamos a importância de se estabelecer valores de referência e realizar uma análise quantitativa para garantir uma interpretação mais precisa do exame. Além disso, os valores de referência apresentados neste estudo podem ser utilizados, desde que validados, em outros laboratórios com um número menor de amostras.