E2F转录因子2对多发性骨髓瘤细胞粘附的影响

Abstract

目的结合生物信息学途径和细胞分子实验，探讨E2F转录因子2（E2F2）对多发性骨髓瘤细胞粘附的影响。方法首先，利用临床样本和GEO数据库分析E2F2在骨髓瘤中的表达水平与患者的预后关系。其次，从敲低E2F2的骨髓瘤细胞系MM.1S的RNA-seq数据中筛选差异基因，并进行GO功能富集和KEGG信号通路分析，同时，利用string网站进行蛋白互作网络分析。构建稳定敲低E2F2的骨髓瘤细胞系MM.1S，并经蛋白印迹法（Western Blot）和荧光定量PCR（qRT-PCR）检测E2F2的表达水平。通过细胞粘附实验检测稳定敲低E2F2对骨髓瘤细胞粘附的影响，利用qRT-PCR检测稳定敲低E2F2后细胞粘附相关基因的表达变化。通过细胞迁移实验检测稳定敲低E2F2对骨髓瘤细胞迁移的影响。结果我们在骨髓瘤患者的临床样本中观察到E2F2的表达显著升高，GEO数据库结果显示E2F2在骨髓瘤中高表达提示患者预后不良。分析RNA-Seq数据获得815个共同差异基因，其中508个基因上调表达，307个基因下调表达，这些差异基因与细胞粘附和血管生成等功能密切相关。经Western Blot和qRT-PCR验证，成功构建稳定敲低E2F2的MM.1S细胞系。敲低E2F2显著增加 MM.1S细胞的粘附水平和升高FN1、PECAM1、ICOSLG等细胞粘附相关基因的表达，同时减弱MM.1S细胞迁移侵袭的能力，P值均 < 0.05。结论通过对RNA-seq数据的生物信息学分析，我们发现转录因子E2F2与骨髓瘤的细胞粘附密切相关，在骨髓瘤MM.1S细胞系中敲低E2F2能促进细胞粘附相关基因的表达和增加细胞粘附水平，并抑制细胞迁移能力。

Keywords

• 多发性骨髓瘤;E2F2;细胞粘附