AVALIAÇÃO DE ESTABILIDADE DE CÉLULAS PLASMÁTICAS EM MEDULA ÓSSEA POR CITOMETRIA DE FLUXO

Abstract

Introdução: As células plasmáticas (PC) são sensíveis e podem se deteriorar rapidamente após a coleta da amostra ou devido ao seu manuseio adverso. Quando existe a possibilidade de processamento da amostra com tempo acima de 24 horas após a coleta, é importante verificar se as PC se mantém estáveis. O objetivo desse estudo foi definir a estabilidade das PC em medula óssea (MO) em até 48 horas após a coleta da amostra através da avaliação dos marcadores plasmocitários CD38 e CD138. Materiais e métodos: Foram avaliadas 19 amostras de MO (sem uso de meio conservante) nos tempos 0, 24h e 48h, coletadas em anticoagulante EDTA e armazenadas a 4 °C antes do processamento e marcação. Para definir a estabilidade dessas amostras, foi avaliado o MFI (intensidade média de fluorescência). Os protocolos de preparação/marcação das amostras foram realizados com base nos marcadores para o painel de triagem de gamopatia monoclonal, a aquisição em equipamento FACS CANTO II e FACS Lyric e a análise de dados realizada com software Infinicyt. Análise estatística feita através do Paired t-test, considerando resultados estatisticamente significativos aqueles com p < 0,05. Resultados e discussão: Segundo o Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic Hematolymphoid Cells; Approved Guideline-Seconde Edition, amostras de MO coletadas em anticoagulante EDTA devem ser analisadas dentro de 12 a 24 horas, mas diante dos desafios de serviços de citometria de fluxo centralizados, existe a necessidade de transportar e armazenar essas amostras por mais tempo. Para avaliar o impacto do transporte e armazenamento de MO nas PC, os MFIs dos marcadores CD38 e CD138 foram analisados. Ambos marcadores não apresentaram diferença significativa entre os tempos avaliados. Já na avaliação das PC anormais apenas, o marcador CD138 apresentou p < 0,05 entre os tempos 0-48h. Esse dado é concordante com dados da literatura que indicam que PC anormais podem apresentar expressão reduzida de CD138 conforme ocorre perda de viabilidade das células após a coleta de MO, bem como a diminuição da frequência dessas células e de PC normais. Conclusão: Diante dessas observações, concluiu-se que as células plasmáticas (normais e anormais) podem ser avaliadas pelo CD38 em até 48h sem alteração significativa na avaliação de MFI, permitindo que a citometria de fluxo auxilie de forma confiável e efetiva no diagnóstico laboratorial de gamopatias monoclonais.