DETECÇÃO DE LISTERIA MONOCYTOGENES PELA TÉCNICA DA REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) EM AMOSTRAS DE LEITE BOVINO IN NATURA

Abstract

Considerando a possível incidência de Listeria monocytogenes em alimentos crus e sua patogenicidade e risco para a saúde, o presente trabalho teve como objetivo comparar técnicas de extração de DNA bacteriano de amostras de leite e investigar a presença de L. monocytogenes pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de leite bovino in natura. Foram testados quatro protocolos diferentes de extração (genericamente identificados: A, B, C, e D) para o isolamento do DNA bacteriano diretamente do leite. Em todos eles foi obtida a identificação do produto de 702 pb (pares de bases) correspondente ao gene da Listeriolisina de L. monocytogenes. O protocolo B que continha proteinase K e fenol tamponado, foi o escolhido para a extração de DNA das amostras de leite de oito produtores de médio porte no interior do RS. A posterior amplificação por PCR com o DNA obtido pelo protocolo B permitiu a identificação de L. monocytogenes a partir de 103 UFC/mL. Nenhuma das amostras dos produtores foi positiva para L. monocytogenes pela técnica de PCR ou pela análise microbiológica convencional. Com o presente estudo conclui-se que, dos protocolos testados, o protocolo B foi mais eficaz para a detecção de L. monocytogenes pela técnica de PCR. Além disso, com relação às amostras dos produtores, o resultado pela técnica por PCR foi obtido em um período de tempo menor que na análise convencional de L. monocytogenes, fato que pode possibilitar um tratamento mais precoce dos animais contaminados e assim evitar perdas ao produtor.

Keywords

• micro-organismo
• Listeriolisina
• proteinase K