Acta Biológica Colombiana (Jul 2006)
Desarrollo de un sistema de selección positiva para plantas transgénicas de papa (Solanum tuberosum SSP andígena var diacol capiro)
Abstract
Dentro del proceso para la obtención de plantas transgénicas, la selección es una etapa fundamental puesto que permite identificar el material potencialmente transformado. Los métodos convencionalmente utilizados son efectivos, pero han sido ampliamente cuestionados, principalmente por aspectos relacionados con bioseguridad, por lo cual, se han desarrollando nuevas estrategias para su reemplazo. Dentro de estas, el sistema de selección positiva pmi/manosa, ha demostrado alta efectividad en la identificación de plantas transgénicas de distintas especies. Con el objetivo de desarrollar un sistema de selección pmi/manosa para la variedad Diacol Capiro, se establecieron las condiciones necesarias para la transformación de entrenudos con la cepa LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens que contiene el vector binario pNOV022, obteniéndose tasas regenerativas del 80-100% y plantas entre la séptima y novena semana. Se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de manosa sobre la viabilidad y capacidad regenerativa de los explantes, escogiendo la combinación manosa 5g/l y sacarosa 10 g/l para su posterior evaluación en el medio de selección; además se corroboró la utilidad de la manosa como agente selectivo. Los distintos procesos selectivos realizados, generaron frecuencias de selección entre 1 y 20%, con tasas esperadas de escapes entre 0 y 8%. El análisis por PCR determinó amplificación de un fragmento específico pmi en dos plantas provenientes de un mismo explante, correspondiendo a una frecuencia de transformación del 2,8%. La prueba del rojo de clorofenol indicó expresión indirecta de la proteína PMI en las dos plantas PCR positivas.
