Tạo dòng, biểu hiện và tái gấp cuộn prion protein (PrPc) chuột dung hợp với GST

Abstract

Vaccine đường uống là chiến lược tiềm năng hiện nay trong việc điều trị các bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa với nhiều ưu điểm nổi bật hơn hẳn so với vaccine truyền thống dạng tiêm. Nhằm giải quyết tình trạng dung nạp miễn dịch và sự phân tán kháng nguyên ở ruột, tế bào M hiện diện trong đường ruột là mục tiêu cần nhắm trúng đích cho việc vận chuyển kháng nguyên uống hiệu quả. Thụ thể PrPC của tế bào M được chứng minh là có tương tác với heat shock protein (Hsp60). Trong nghiên cứu in silico trước, nhóm nghiên cứu đã dự đoán được hai pep-tít đóng vai trò chính trong tương tác của Hsp60 với thụ thể PrPC. Để khẳng định tính bám của các trình tự dự đoán, PrPC tái tổ hợp cần được tạo ra để phục vụ cho nghiên cứu tương tác. Trong nghiên cứu này, gen mã hóa cho PrPC chuột (mPrPc) sẽ được dòng hóa vào vector pET-gst để tạo vector tái tổ hợp pET-gst-mPrPc. Tiếp đó, vector được chuyển vào chủng Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) để cảm ứng biểu hiện protein. Kết quả phân tích SDS-PAGE và Western blot với kháng thể kháng GST cho thấy protein tái tổ hợp GST-mPrPC biểu hiện ở dạng thể vùi nên được tiến hành hòa tan và tái gấp cuộn. Sau quá trình tái gấp cuộn, protein GST-mPrPC được thu nhận ở dạng tan với hiệu suất tái gấp cuộn 88,33%.

Keywords

• tế bào M
• thụ thể PrPC
• vaccine uống