丙型肝炎病毒C,E2 ,NS3 区基因嵌合重组载体的构建

Abstract

【目的】构建包含丙型肝炎病毒(HCV)C 区、E2 区及NS3 区的嵌合重组载体。【方法】设计合成3 对寡核苷酸引 物, 用PCR 法从HCV 重组质粒pHCVc 、pBE2 和pGMXNS3-5 中特异扩增出编码HCV C 区、E2 区和NS3 区抗原的部分基因 片段(501、603 和900 bp), 分别用Hin dⅢ 、BamH Ⅰ 、EcoRⅠ 和Xho Ⅰ 酶切后, 逐个定向连接到质粒pcDNA3 中, 转化宿主菌 XL1-Blue , 分别用上述内切酶酶切及DNA 测序鉴定重组质粒。【结果】酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符, 测序结 果与文献报道序列及预计结果一致, 证实符合表达框架。【结论】成功构建了HCV 嵌合重组质粒pcDNA3-C-E2-NS3 。