EB 病毒 3 种全基因的扩增、克隆及表达

Abstract

目的: 扩增克隆及表达 EB 病毒( EBV) 3 种( DNA 酶、胸苷激酶及 BHRF1)全基因片段。方法: 以 B95-8细胞株 DNA 为模板,PCR 扩增 3 种目的基因。酶切鉴定后分别与高效表达载体 pBV221 连接, 用大肠杆菌 JM103 或 HB101 作为转 化的宿主菌。抗氨苄青霉素培养形成单菌落后放大培养,根据重组质粒的电泳行为粗筛, 再双酶切鉴定。结果: 各种阳性菌 经 30℃※42℃变温诱导培养,超声破碎后其上清液经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE) ,分别新出现一条 分子大小为 52 ku,67 ku及 17 ku 蛋白区带,符合 EBV 该 3种全基因所编码蛋白质大小。凝胶中蛋白质定量扫描结果显示目 的蛋白质分别占宿主菌总蛋白质的 23%, 6. 7%和 2. 5%。结论: 实现了 EBV 3 种全基因的扩增、克隆及在原核体系的表达。