EFEITO DO TRATAMENTO COM TKI-258 E IL-2 SOBRE A MORTE CELULAR EM CO-CULTURAS DE CÉLULAS MONONUCLEARES E LINHAGEM TUMORAL DE LINFOMA DE BURKITT

Abstract

Objetivos: O linfoma de Burkitt é caracterizado por ser uma forma agressiva de linfoma de células B e seu tratamento é realizado por meio de quimioterapia, mas não utiliza inibidores de receptores tirosinaquinase. O TKI-258 é um inibidor de múltiplos receptores tirosinaquinase, ainda em fase de estudos, já testado em diferentes tumores sólidos. O objetivo deste estudo foi avaliar os índices de morte celular em co-culturas de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e células de linhagem tumoral de Linfoma de Burkitt (RAJI) após tratamento com interleucina-2 (IL-2), TKI-258 e IL-2 em conjunto com TKI-258. Materiais e métodos: Foram utilizadas PBMCs, extraídas por meio da centrifugação com Ficoll-Paque™, e células imortalizadas da linhagem RAJI de Linfoma de Burkitt. As células foram preservadas em incubadora úmida em meio RPMI-1640 a 37 °C, contendo penicilina/estreptomicina e 10% de soro fetal bovino. O índice de citotoxicidade (IC50) do TKI-258 foi determinado previamente por meio citometria de fluxo e calculado pelo teste de regressão não linear, sendo este de 1,5 μM. Em placa de 96 poços foi realizada a co-cultura das PBMCs com as células RAJI, na proporção de 1×106 para 1×105 células por poço, respectivamente. Em seguida, as co-culturas foram divididas em: não tratadas, tratadas com IL-2 1000UI; TKI-258 1,5 μM e TKI-258 1,5 μM mais IL-2 1000UI, e mantidas em incubadora por 4 horas. O percentual de morte celular das co-culturas foi avaliado por citometria de fluxo com marcação com iodeto de propídeo. A análise estatística foi realizada pelo programa GraphPad Prism 9.0.0 sendo considerado estatisticamente significativo quando p < 0,05. Resultados: Foram encontradas diferenças significativas entre o grupo não tratado e os demais (RM one-way ANOVA, F(3,39) = 35.04; p < 0.0001). Não foram observadas diferenças entre os grupos não tratado e tratado com IL-2 (p = 0.9293). O grupo tratado com TKI-258 apresentou um aumento na taxa de mortalidade das células neoplásicas comparado aos grupos anteriores (NTxTKI p < 0.0001; IL-2xTKI p < 0.0001). A maior taxa de mortalidade de células neoplásicas foi encontrada nas amostras tratadas com TKI-258 em associação com IL-2 (NTxIL-2+TKI p < 0.0001; IL-2xIL-2+TKI p < 0.0001; TKIxIL-2+TKI p < 0.0017). Discussão: A associação do TKI-258 com IL-2 apresentou resultados superiores na morte de células neoplásicas e na sobrevida das PBMCs quando comparado aos demais grupos analisados. Diante disso, a IL-2 parece favorecer a atuação desse fármaco, e permitindo a sua atuação em diversas vias simultaneamente, uma vez que, este é um inibidor multi-alvos. Conclusão: O estudo evidenciou que o TKI-258 em associação com a IL-2 foi capaz de produzir uma maior taxa de mortalidade de células da linhagem RAJI quando comparadas com os demais grupos. Novos ensaios com este inibidor em associação ou não à IL-2, para o tratamento para Linfoma de Burkitt são necessários, uma vez que na atualidade, os inibidores de receptores tirosina quinase não são utilizados e os nossos resultados evidenciam o seu potencial terapêutico para o tratamento desta neoplasia.