Determinación de fenilalanina y galactosa total a partir de una muestra de sangre seca en papel de filtro: aplicación al tamizaje neonatal

Abstract

Los programas de tamizaje neonatal para alteraciones metabólicas deben incluir como mínimo la detección de fenilcetonuria e hipotiroidismo congénito. En este estudio evaluamos un método que cuantifica el valor de galactosa total (Gal) y fenilalanina (Phe) a partir de un disco de sangre seca en papel de filtro, eluido con agua destilada, previa desproteinización con metanol-acetona; posteriormente, se transfirieron 10 uL del eluido a una placa ultramicroELISA y se le añadió la mezcla de reactivos para determinar Phe; al remanente se le añadieron los reactivos para cuantificar Gal. El método fue lineal en un rango de concentración de 0-50 mg/dL para Phe y 0- 60 mg/dl para Gal; el límite de detección para Phe/Gal fue de 0,14/0,9 mg/dl; se evaluaron tres muestras con niveles bajo, medio y elevado de Phe/Gal y se obtuvo una imprecisión intraensayo de 6,8 ± 1,7/7,8 ± 2% y una imprecisión interensayo de 5,4 ± 0,7/7,5 ± 1,8%, respectivamente. La recuperación analítica fue de 100,2% ± 1,9% para Gal y 100,3% ± 1,7% para Phe. No se evidenciaron interferencias con los antibióticos evaluados. Se realizó un estudio con 1.000 muestras de neonatos entre las que se encontraron cuatro muestras con concentraciones de Phe y dos con concentraciones de Gal por encima de los niveles de corte para estos analitos. Se obtuvo una excelente correlación lineal entre los dos métodos con que fueron evaluadas de forma comparativa las muestras (UMTEST PKU e ICN GAL-M W EA). Este método permite incorporar una enfermedad metabólica de baja incidencia (galactosemia 1:30.000), en un programa de tamizaje masivo para la detección de fenilcetonuria, lo que justificaría el costo del tamizaje neonatal.

Keywords

• galactosaemia
• phenylketonuria
• neonatal screening